碱性成纤维生长因子、表皮生长因子和血小板衍生因子对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

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目的 观察碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和血小板衍生因子(PDGF-BB)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖和成骨分化的影响.方法 采用贴壁培养纯化小鼠BMSCs,培养液(DMEM/F12,10%胎牛血清,青、链霉素)中添加(实验组)或者不添加(对照组)细胞因子bFGF、EGF和PDGF-BB(浓度均为10μg/L)进行培养,取传至第3代的细胞进行成骨分化,成骨诱导液:1×10-8 mol/L地塞米松、50 μmol/L抗坏血酸、10 mmol/L β-甘油磷酸钠.流式细胞仪检测细胞表面标记抗原CD45和CD90的表达;SYBgreen荧光定量聚合酶链反应(PCR)扩增检测成骨细胞特异性基因骨钙素和Ⅰ型胶原的表达;碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测成骨细胞的分化.结果 初始接种后,对照组的小鼠BMSCs贴壁较快,而传代后实验组的小鼠BMSCs增殖较快.对照组和实验组的小鼠BMSCs经传代纯化后CD45、CD90的阳性表达率分别为(27.34±0.69)%、(41.93 ±0.34)%和(0.48±0.12)%、(82.78 ±0.25)%,实验组的小鼠BMSCs在传代过程中较少观察到细胞的老化现象,细胞的纯化程度较高,而且其向成骨分化的效率明显高于对照组细胞.结论 联合使用细胞因子bFGF、EGF和PDGF-BB可促进小鼠间BMSCs的体外增殖和干性的维持,并且有利于其向成骨细胞的分化。

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