【摘 要】
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为获取大量高纯度的枯斑三生烟SKP1蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-SKP1质粒为模板,PCR扩增枯斑三生烟的SKP1基因的cDNA编码区,经酶切后构建表达载体pET23b-SKP1,转入大肠
【机 构】
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中国科学院大连化学物理研究所,大连水产学院
【基金项目】
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国家“863”计划项目(2006AA10A213,2007AA091601);中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX2-YW-G-041,KSCX2-YW-N-007);辽宁省自然科学基金项目(20082153)
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为获取大量高纯度的枯斑三生烟SKP1蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-SKP1质粒为模板,PCR扩增枯斑三生烟的SKP1基因的cDNA编码区,经酶切后构建表达载体pET23b-SKP1,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并考察不同的IPTG诱导终浓度、表达时间和表达温度对目的蛋白His-SKP1表达量的影响。SDS-PAGE分析结果表明:最佳表达条件为不加诱导剂的情况下,37℃表达8 h。
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