短链酰基辅酶A脱氢酶在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

来源 :中华危重病急救医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bleachji
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

观察短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中的变化,探讨其与细胞凋亡的关系。

方法

取正常培养2~3 d的HUVEC,采用叔丁基过氧化氢(tBHP)刺激HUVEC建立细胞凋亡模型,分别用0、10、20、30、40、50 μmol/L的tBHP干预HUVEC 12 h,用50 μmol/L的tBHP干预HUVEC 0、3、6、9、12 h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)分别检测SCAD的mRNA及蛋白表达,以筛选tBHP干预HUVEC的最佳浓度和时间。用小干扰RNA(siRNA)干扰HUVEC的SCAD基因(siRNA274、siRNA414、siRNA679),通过检测SCAD mRNA和蛋白表达及SCAD酶活性,以筛选siRNA最佳干扰序列。然后以最佳干扰序列及tBHP同时干预HUVEC,通过检测细胞活性、细胞凋亡率、SCAD酶活性、SCAD mRNA和蛋白表达、活性氧(ROS)含量、三磷酸腺苷(ATP)含量和游离脂肪酸(FFA)含量,观察SCAD对HUVEC细胞凋亡的影响。

结果

①随tBHP浓度增加及干预时间延长,细胞活性及SCAD mRNA和蛋白表达均逐渐降低,呈浓度和时间依赖性,以50 μmol/L tBHP干预HUVEC 12 h各指标下降最为显著。②在siRNA274、siRNA414、siRNA679 3条干扰序列中,siRNA679转染在降低SCAD mRNA和蛋白表达及酶活性方面最为显著。③与空白对照组相比,siRNA679干扰后细胞活性明显下降(A值:0.48±0.09比1.00±0.09,P<0.01),细胞凋亡率明显增加〔(29.96±2.09)%比(2.90±1.90)%,P<0.01〕,HUVEC中SCAD mRNA和蛋白表达、SCAD酶活性及ATP含量均显著下降〔SCAD mRNA(2-ΔΔCt):0.50±0.16比1.34±0.12,SCAD/α-Tubulin:0.67±0.11比1.00±0.06,SCAD酶活性(kU/g):0.38±0.04比0.53±0.04,ATP含量(μmol/g):0.14±0.02比0.19±0.01,均P<0.05〕,FFA及ROS含量显著增加〔FFA(nmol/g):0.84±0.07比0.47±0.04,ROS(平均荧光强度):647.5±23.7比434.2±46.5,均P<0.01〕。siRNA转染组各指标与tBHP诱导的HUVEC凋亡趋势一致。

结论

SCAD表达失调可能参与HUVEC细胞凋亡过程,上调SCAD可能成为干预细胞凋亡的重要环节之一。

其他文献
目的:分析并研究临床护理路径在宫颈癌介入治疗中的效果.方法:本次实验共有84例患者参与实验,所有患者均是我院2017年3月-2019年3月收治的宫颈癌患者,将所有患者随机平均分为
目的:总结中医治疗难治性肾病综合征的临床体会.方法:将40例难治性肾病综合征患者随机分为治疗组和对照组各20例,对照组患者采用常规西医治疗,治疗组患者在对照组的基础上加
陕西省延安市方×我患2型糖尿病已经8年了,感觉血糖控制随着年龄增长变得越来越困难.上个月去医院复查糖化血红蛋白达到了8.5%,而三年前我的糖化血红蛋白一直都控制在7%以下.rn
期刊
最近有学者进行了一项病例对照研究,旨在通过标准的细菌培养及宏分类组学分析对比鉴定呼吸机相关性肺炎(VAP)患者与非VAP对照患者在插管过程中呼吸道菌群组成上的差异,以了解
目的 评价含呋喃唑酮10 d序贯疗法和含铋剂10 d四联疗法与传统三联疗法根除幽门螺杆菌(Hp)的疗效.方法 将符合人选标准的120例Hp阳性患者按随机数字表法分为三组,每组40例.A组:前5 d予雷贝拉唑10mg+阿莫西林1000mg,2次/d;后5d予雷贝拉唑10mg+克拉霉素500mg+呋喃唑酮100mg,2次/d.B组:予雷贝拉唑10 mg+阿莫西林1000mg+克拉霉素500mg+枸橼酸
目的 探讨内镜下胆管支架置入治疗恶性梗阻性黄疸的护理要点和术中配合体会.方法 对36例恶性梗阻性黄疸先行内镜下逆行胰胆管造影(ERCP),确定胆管梗阻的长度、位置,选择合适
期刊
目的:探究在肛肠外科护理中中医辨证体系应用效果及内容情况.方法:纳入2017年7月至2019年3月期间,我院肛肠科接受治疗的患者320例作为本研究观察对象,结合患者接受治疗的先后
目的:研究敷胸膏外敷法治疗小儿肺炎的临床疗效。方法:将30例肺炎患儿随机均分为对照组和观察组各15例,对照组患儿口服五虎汤联合葶苈泻肺汤治疗,观察组患儿采用敷胸膏外敷治