目的 观察雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎(AP)细胞模型中酶噬的变化.方法 培养AR42J细胞株(胰腺外分泌细胞),将细胞接种于6孔板培养至90％融合,分为AP组与空白对照组,AP组加入终浓度为1×10-8 mol/L的雨蛙肽建立AP细胞模型,空白对照组加入1640培养液.在雨蛙肽处理后1、4、6、8、12、24 h收集细胞及培养上清液,以ELISA方法检测上清液中炎性因子IL-1、TNFα、淀粉酶及胰蛋白酶原活化肽(TAP)水平.取各组细胞,采用RT-PCR和Western印迹法检测LC3、Beclin-1mRNA和 LC3B蛋白的表达.透射电子显微镜观察各组细胞酶噬小体的变化.组间比较采用方差分析.结果 空白对照组上清液中的IL-1、TNFα、淀粉酶和TAP分别为(18.83±7.10) pg/mL、(14.20±3.79) pg/mL、(10.03±2.85)U/L、(39.48±8.62) pg/mL,AP组在1h时即显著升高至(62.13±11.25) pg/mL,(30.98±7.11) pg/mL、(25.06±6.82) U/L、(128.51±18.30) pg/mL,差异均有统计学意义(F=3.32、3.05、2.90、2.62,P＜0.05或0.01)在4或6h时达到高峰[IL-1在4h为(71.96±15.82) pg/mL,F=7.25,P＜0.01;TNFα在6h时为(39.92±8.94) pg/mL,F=4.93,P＜0.05;淀粉酶在4h时为(28.83±8.31) U/L,F=2.06,P＜0.05;TAP在4h时为(146.29±29.36) pg/mL,F=0.14,P＜0.01],之后逐渐下降趋于稳定,AP组细胞中第4、6h的LC3 mRNA含量为3.18±0.82、1.71±0.14,第1、4h时的Beclin-1 mRNA含量为2.44±0.34、4.13±0.30,较空白对照组(0.21±0.04、0.30±0.08)均明显上升(LC3 mRNA,F=0.79、0.06 ;Beclin mRNA,F=2.31、0.36,P均＜0.05),其余时间点差异均无统计学意义(P均＞0.05).电子显微镜下可见AP组自噬体和酶噬小体数目显著多于空白对照组.结论 雨蛙肽诱导AP细胞模型时伴有酶噬的发生,提示酶噬可能参与了AP的发病机制。
雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎细胞模型中酶噬的变化
【摘 要】
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目的 观察雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎(AP)细胞模型中酶噬的变化.方法 培养AR42J细胞株(胰腺外分泌细胞),将细胞接种于6孔板培养至90％融合,分为AP组与空白对照组,AP组加入终浓度为1×10-8 mol/L的雨蛙肽建立AP细胞模型,空白对照组加入1640培养液.在雨蛙肽处理后1、4、6、8、12、24 h收集细胞及培养上清液,以ELISA方法检测上清液中炎性因子IL-1、TNFα、淀粉酶
【机 构】
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200433上海,长海医院消化内科,200433上海,长海医院消化内科,200433上海,长海医院消化内科,200433上海,长海医院消化内科,200433上海,长海医院消化内科
【出 处】
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中华消化杂志
【发表日期】
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2014年34期
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