【摘 要】
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为探讨异丙酚在脓毒症诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠模型中的保护作用并通过体外试验观察其对甲酰基肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)激动剂诱导的人中性粒细胞活化的抑制作用,将40只小鼠随机分为4组,每组10只:1组为用50μL 10％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理的假手术小鼠;2组为用50 μL异丙酚(40 mg/kg)处理的假手术小鼠;3组为用50μL 10％ DMSO处理的脓毒症小鼠(该模型通过单次
【机 构】
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海南西部中心医院麻醉科,儋州 571700;上海第九人民医院麻醉科,上海200011
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为探讨异丙酚在脓毒症诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠模型中的保护作用并通过体外试验观察其对甲酰基肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)激动剂诱导的人中性粒细胞活化的抑制作用,将40只小鼠随机分为4组,每组10只:1组为用50μL 10％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理的假手术小鼠;2组为用50 μL异丙酚(40 mg/kg)处理的假手术小鼠;3组为用50μL 10％ DMSO处理的脓毒症小鼠(该模型通过单次腹腔注射200 μL LPS构建);4组为用50 μL异丙酚(40 mg/kg)处理的脓毒症小鼠.采用免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织中FPR1、淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6 complex locus G,Ly6G)表达;髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)测定试剂盒评估肺组织中MPO活性;ELISA检测试剂盒评估支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中主要炎性因子水平.此外,体外条件下于培养的人中性粒细胞中分别添加DMSO或异丙酚,采用分光光度法检测中性粒细胞释放弹性蛋白酶和超氧化物的情况;Western blotting检测促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路蛋白的表达情况.结果 显示,脓毒症显著增加了小鼠肺部组织FPR1和Ly6G蛋白表达水平及MPO活性(均P＜0.01),而经腹腔异丙酚注射可有效减少FPR1和Ly6G蛋白表达并显著抑制MPO活性(P＜0.01).与假手术组相比,脓毒症小鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和CXCL1表达水平显著增加(均P＜0.01),而异丙酚腹腔注射显著逆转了上述变化(均P＜0.05).体外试验结果显示,异丙酚(5～ 100 μmol/L)剂量依赖性地显著减少了N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLF)诱导的中性粒细胞弹性蛋白酶和超氧化物释放(均P＜0.05).Western blotting分析显示,异丙酚显著降低了fMLF诱导的人中性粒细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、p38 MAPK和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化水平(均P＜0.001).由此,在脓毒症诱导的小鼠ALI模型中,异丙酚腹腔注射可显著改善其肺部损伤,下调FPR1和Ly6G表达及肺组织中中性粒细胞数.进一步体外试验证实,异丙酚对fMLF诱导的中性粒细胞活化的抑制作用是通过与FPR1结合介导的,可抑制FPR1下游信号转导和炎症级联反应.
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