探讨地塞米松对脓毒症幼年Wistar大鼠大脑皮质细胞和神经元LC3表达的影响。
方法阑尾结扎穿孔术(CLP)建立幼年Wistar脓毒症大鼠模型。60只30日龄健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为假手术组(10只)、脓毒症未治疗组(25只)和地塞米松组(25只)。地塞米松组在CLP后12 h时行尾静脉注射地塞米松(1 mg/kg),隔天1次,共3次,脓毒症未治疗组注射同剂量的9 g/L盐水。定期对大鼠进行神经行为学评分。大鼠40日龄时被统一处死,取大鼠大脑皮质组织,免疫荧光检测大脑皮质细胞LC3和神经元核抗原(NeuN)的表达,图像分析系统软件统计表达阳性的细胞数量,Western blot检测LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白的表达。
结果CLP后3 h时Wistar大鼠开始出现蜷缩少动、竖毛、寒战等表现,脓毒症未治疗组大鼠神经行为学评分低于假手术组(t=9.895,P=0.000)。CLP后10 d(即大鼠40日龄),地塞米松组25只大鼠死亡12只,死亡率48%,脓毒症未治疗组25只大鼠死亡8只,死亡率32%,2组死亡率差异无统计学意义(χ2=1.333,P=0.248)。免疫荧光染色和图像分析提示:与假手术组和地塞米松组比较,脓毒症未治疗组大鼠大脑皮质LC3阳性细胞的比例明显增多(0.606 7±0.030 1比0.353 3±0.025 8,t=15.644,P=0.000;0.606 7±0.030 1比0.270 3±0.019 4,t=22.450,P=0.000)。Western blot检测表明:脓毒症未治疗组大鼠大脑皮质细胞LC3-Ⅱ表达上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显高于假手术组和地塞米松组(0.413 3±0.022 5比0.205 0±0.015 2,t=18.802,P=0.000;0.413 3±0.022 5比0.185 0±0.023 5,t=17.206,P=0.000)。假手术组和地塞米松组大鼠大脑皮质LC3阳性神经元较少,与假手术组和地塞米松组比较,脓毒症未治疗组大鼠大脑皮质LC3阳性神经元明显增多(0.580 0±0.020 0比0.298 3±0.014 7,t=27.783,P=0.000;0.580 0±0.020 0比0.261 7±0.017 2,t=28.614,P=0.000)。
结论幼年Wistar大鼠在脓毒症时大脑皮质表达LC3的细胞数量增多,LC3-Ⅱ表达上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,LC3阳性神经元数量也增多,而地塞米松对其具有抑制作用。