【摘 要】
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目的探讨骨髓间充质干细胞（BMMSC）联合常温机械灌注（NMP）保存大鼠心脏死亡后捐献（DCD）供肝肝移植后对胆管上皮细胞（BEC）的保护作用。方法取2～3周龄、体重40～60 g雄性SD大鼠，体外提取、培养、鉴定和扩增BMMSC至第3代。取6～8周龄、体重200～220 g雄性SD大鼠，按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、冷保存组（SCS组）、单纯NMP组（NMP组）和BMMSC联合NMP
【机 构】
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天津医科大学一中心临床学院 300192,天津市第一中心医院器官移植科，天津市器官移植重点实验室，天津市器官移植临床医学研究中心，卫生部危重病急救医学重点实验室，中国医学科学院移植医学重点实验室 30
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目的探讨骨髓间充质干细胞（BMMSC）联合常温机械灌注（NMP）保存大鼠心脏死亡后捐献（DCD）供肝肝移植后对胆管上皮细胞（BEC）的保护作用。
方法取2～3周龄、体重40～60 g雄性SD大鼠，体外提取、培养、鉴定和扩增BMMSC至第3代。取6～8周龄、体重200～220 g雄性SD大鼠，按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、冷保存组（SCS组）、单纯NMP组（NMP组）和BMMSC联合NMP组（BMMSC+NMP组），每组44只。建立心脏死亡后热缺血30 min DCD供肝模型；Sham组仅游离肝脏韧带，不阻断肝脏血供，30 min后缝合。SCS组供肝采用器官保存液（UW）冷保存4 h；NMP组和BMMSC+NMP组建立体外稳定的NMP系统装置，给予灌注液或联合BMMSC灌注4 h；建立原位肝移植术模型，并分别于肝移植术后0、1、7、14 d观察受体存活率。各组于术后各时间点采用生化法检测血清肝功能指标；通过苏木素-伊红（HE）染色观察胆管组织形态学改变；采用免疫组化法和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）定性、定量检测BEC中细胞角蛋白19（CK19）的表达。
结果经BMMSC的形态、分化功能和表型鉴定，证实本实验中采用的干细胞为符合标准的BMMSC。NMP组和BMMSC+NMP组大鼠术后0、1、7、14 d存活率均较SCS组明显升高，以BMMSC+NMP组升高更为显著，术后0 d存活率达100%，14 d存活率仍明显高于SCS组和NMP组〔80.0%（16/20）比20.0%（4/20）、70.0%（14/20），均P<0.05〕。随肝移植术后时间延长，SCS组大鼠肝功能指标异常逐渐明显，术后1～7 d达峰值；光镜下显示，胆管组织损伤逐渐加重，术后7 d损伤程度最严重，表现为肝细胞出现大量"气球样"改变，胆管扩张明显并伴有大面积炎性细胞浸润；免疫组化和Western Blot均显示，BEC胞质内CK19表达逐渐减少，7 d达谷值，随后逐渐回升。BMMSC+NMP组和NMP组在肝功能、胆管病理形态学观察以及BEC中CK19表达等方面均明显优于SCS组，以BMMSC+NMP组改善更为显著，表明BMMSC联合NMP对BEC的保护作用明显优于SCS和NMP。
结论通过BMMSC联合NMP体外保存大鼠DCD供肝，可以显著减轻肝移植术后BEC损伤，从而改善大鼠肝移植预后，提高移植术后存活率。
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