【摘 要】
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目的 检测尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1和人粒-单核细胞集落刺激因子(hGMCSF)基因修饰的树突细胞(DC)疫苗对尤文肉瘤细胞株A673的杀伤作用.方法利用hGM-CSF腺病毒(AdhGM-CSF),在1 000 U/ml IL-4作用下,从外周血单个核细胞(PBMC)诱生树突细胞(DC)并对其表型进行流氏细胞仪(FCM)分析,通过同种混合淋巴细胞反应以检测其免疫刺激活性.在lipofecta
【机 构】
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目的 检测尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1和人粒-单核细胞集落刺激因子(hGMCSF)基因修饰的树突细胞(DC)疫苗对尤文肉瘤细胞株A673的杀伤作用.方法利用hGM-CSF腺病毒(AdhGM-CSF),在1 000 U/ml IL-4作用下,从外周血单个核细胞(PBMC)诱生树突细胞(DC)并对其表型进行流氏细胞仪(FCM)分析,通过同种混合淋巴细胞反应以检测其免疫刺激活性.在lipofectamine的介导下,将含有尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1的真核表达质粒pCA13/EWSFLI1转染DC,通过RT-PCR检测EWS-FLI1的表达,并通过乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测其对A673细胞的杀伤作用.结果应用AdhGM-CSF从PBMC成功诱生出CD83、CD80、CD86及HLA-DR高表达,CD14低表达的DC,其对同种淋巴细胞有很强的免疫刺激活性.pCA13/EWSFLI1转染DC后,RT-PCR检测DC中有EWS-FLI1mRNA的表达.杀伤试验结果表明,AdhGMCSF诱生、EWS-FLI1修饰的DC,体外诱导抗原特异的CTL,效靶比为20:1时对A673细胞杀伤率为(29.9500±0.011 7)%,高于对照组(P<0.01).结论AdhGM-CSF能够成功地从PBMC中诱生出有功能的DC.真核表达质粒pCA13/EWS-FLI1在lipofectamine的介导下转染AdhGM-CSF诱生的DC,能在DC中有效地表达.此EWS-FLI1基因修饰的、AdhGM-CSF诱生的DC体外致敏自体T淋巴细胞,生成抗原特异CTL,对尤文肉瘤细胞A673有一定的杀伤作用。
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