探讨酪氨酸激酶抑制剂Genistein对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及其机制。
方法采用随机数字表法将36只7日龄清洁级C57BL/6J小鼠随机分为高氧诱导组、Genistein组、二甲亚砜(DMSO)组和正常对照组，每组9只。高氧诱导组、Genistein组、DMSO组小鼠与母鼠在氧体积分数为(75±2)%的密闭氧箱内喂养5 d，然后返回到正常室内环境中喂养5 d。高氧诱导组小鼠不给予药物处理，Genistein组和DMSO组小鼠于出生后12 d玻璃体腔内分别注射Genistein(溶于DMSO，400 mg/L)和DMSO各1 μl。正常对照组小鼠在正常室内环境中喂养。各组分别取2只17 d鼠龄小鼠，采用视网膜血管荧光造影后制备视网膜铺片，于荧光显微镜下观察小鼠双眼视网膜血管形态。另将各组各7只小鼠全部处死，获取双眼视网膜，采用实时荧光定量PCR法测定小鼠视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的相对表达量(2－ΔΔCt)；采用Western blot法测定各组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白的相对表达量。
结果荧光显微镜下可见正常对照组小鼠视网膜主要血管和毛细血管形态正常，高氧诱导组和DMSO处理组小鼠血管迂曲，较多新生血管簇和视网膜缺血无灌注区，Genistein处理组小鼠视网膜血管清晰，可见无灌注区。正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和Genistein组小鼠视网膜中VEGF mRNA相对表达量分别为0.04±0.02、0.64±0.25、0.37±0.23和0.03±0.02，bFGF mRNA相对表达量分别为0.67±0.23、21.40±3.07、17.22±2.63和0.52±0.25，与正常对照组和Genistein组比较，高氧诱导组和DMSO组小鼠视网膜中VEGF mRNA和bFGF mRNA的相对表达量均显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)，正常对照组与Genistein组间小鼠视网膜中VEGF mRNA和bFGF mRNA的相对表达量比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和Genistein组小鼠视网膜中VEGF蛋白的相对表达量分别为0.52±0.05、1.01±0.05、1.06±0.07和0.73±0.05，bFGF蛋白相对表达量分别为0.56±0.05、0.97±0.06、1.03±0.08和0.76±0.07，4个组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白相对表达量的总体比较差异均有统计学意义(F＝120.74、57.98，均P＝0.00)。与正常对照组和Genistein组比较，高氧诱导组和DMSO组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论Genistein能抑制高氧诱导的视网膜新生血管的形成，其机制可能是通过抑制组织中VEGF和bFGF的表达。