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用多聚酶链反应(PCR)方法从既往构建质粒扩增鼠表皮生长因子受体(EGFR)胞外段基因及适宜酶切位点,进而构建原核表达载体.克服质粒丢失的不足, 在大肠杆菌中表达目的蛋白,并在变性条件下通过Ni2+柱亲和层析纯化表达蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)示纯度在95%以上.去除组氨酸标记的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性.复性蛋白在表皮生长因子的作用下可以同源二聚化而在非还原SDS-PAGE及蛋白印迹分析中呈二聚体状态, 其所产生抗体可以识别复性蛋白及表达于肺癌细胞上的EGFR, 提示复性后大肠杆菌表达