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目的构建HCV聚合酶基因重组原核表达质粒，研究高效表达聚合酶蛋白的最适条件、表达产物的纯化方法以及最佳变性和复性条件，同时分析其二级结构，为建立细胞外HCV聚合酶复制模型及筛选药物创造条件。方法采用高保真。PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR扩增，从我国HCV RNA阳性病人血清中扩增出HCVNS5b RNA聚合酶全长基因序列，构建原核表达载体。在多个载体中选取pET-30a作为表达载体，选择诱导表达条件。利用Ni^2+金属离子螯和亲和层析将其纯化。同时对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究，对其相关的分