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【摘 要】 目的：建立HPLC法测定刺楸皮中常春藤皂苷元的含量。方法：色谱柱Thermo C18（ 4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸（60∶40），流速1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，进样量10μL。结果：常春藤皂苷元的含量在0.1632～0400μg范围内线性关系良好，平均回收率99.17%，RSD为1.18。结论：本方法简便、灵敏、准确，可作为刺楸皮质量控制的标准。
【关键词】 刺楸皮;常春藤皂苷元;高效液相色谱法;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）12-0039-03
本品为五加科植物 Kalopanax septemlobus （Thunb.） Koidz.的干燥树皮，全年均可采收。贵州民间常用于治疗腰膝肩臂疼痛、风湿痹痛、跌打损伤等[1-2]，目前收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中，但该标准仅从性状和显微鉴别对其进行质量控制，为完善质量标准，达到有效控制药材质量的目的，更好地发挥其治疗作用，保障用药的安全、稳定及有效，需要对刺楸皮进行深一步的研究。据文献报道刺楸中的皂苷成分主要为刺楸皂苷A，其水解产物常春藤皂苷元、阿拉伯糖及鼠李糖[3-4]。常春藤皂苷元是刺楸皮中主要活性成分，具有保肝、抗肿瘤、止痛、止痉、抗真菌、杀虫等多种药理活性[5-6]，与刺楸皮的临床疗效具有相关性。因此采用高效液相色谱对刺楸皮中常春藤皂苷元进行含量测定，以达到完善质量标准及用药的安全性和稳定性的目的，为全面评价刺楸皮药材质量提供参考。
1 材料
1.1 仪器 Ultimate 3000 高效液相色谱仪（美国），KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），METTLER TOLEDO MS204TS 万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）
1.2 试药与试剂 乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸、盐酸均为分析纯，水为超纯水。刺楸皮3批样品;常春藤皂苷元（批号：11733-201205，质量分数98.3%）中国食品药品检定研究院提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸（60∶40）为流动相;检测波长为210nm;柱温：30℃;流速：1.0mL/min，进样量：10μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取常春藤皂苷元对照品20.29mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1mL至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液﹙81.16μg/mL﹚。
2.3 供试品溶液的制备方法 取过三号筛的粉末约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%的甲醇25mL，加热回流30min，滤过，精密量取续滤液10mL置具塞锥形瓶中，加入1.5mL盐酸，加热回流2h，取下，放冷，转移至25mL容量瓶中，用75%的甲醇定容至25mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 系统适应性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液，照“色谱条件”项下进样，记录色谱图，结果供试品与对照品在对应的位置出现色谱峰。色谱图见图1。
2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下对照品溶液2μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL注入高效液相色谱仪器， 测定峰面积。计算回归方程： y=6.7155x-0.0013，r=0.9999﹙n=6﹚，表明常春藤皂苷元在0.1632～2.0400μg的进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验 取“2.2”项下的对照品溶液，连续进样6次，进样量10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算其RSD为0.46%，结果表明，仪器精密度好。
2.7 稳定性试验 取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别于0，2h，4h，6h，8h，10h，24h各进样10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算RSD为0.95%，结果表明，供试品在24h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一批样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备6份供试品溶液，进样量10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，平均含量13.1470/g，计算其RSD为0.62%，表明该方法重现性好。
2.9 加样回收率试验 取已测定含量的刺楸皮样品（平均含量13.1470mg/g）约0.25g，精密称定，置于三角烧瓶中，分别精密加入常春藤皂苷元量对照品溶液（0.1058mg/mL）25mL，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，计算常春藤皂苷元的平均回收率99.19%，RSD为1.18%。见表1。
2.10 不同色谱柱的考察 取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别以不同品牌C18色谱柱（赛默飞Acclaim 120、依利特Hypersil ODS2、安捷伦Eclipse XDB-C18）各进样10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算含量，RSD为0.48%，结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无显著差异。
2.11 不同流速的考察 取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别以流速（0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min）各进样10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算含量，RSD为0.60%。
2.12 范围 按正常测定取样量的80%和120%取样测定，考察在高低取样量测定的精密度。取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别以不同取样量（0.4g、0.5g、0.6g）各进样10μL，測定常春藤皂苷元的峰面积，计算含量，RSD为0.68%。
2.14 样品含量测定 按上述色谱条件，取刺楸皮“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，测定常春藤皂苷元的含量，结果表2。
3 讨论
常春藤皂苷元属于齐墩果烷型五环三萜类化合物，一般可溶于水，易溶于热水、热甲醇及热乙醇，不溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂[6]。利用常春藤皂苷元在甲醇中有较好的溶解度这一特性，选择甲醇作为提取溶剂，再使用盐酸酸水解进一步的提取皂苷元成分，通过本试验筛选出最佳的甲醇浓度为75%，提取方法为回流，盐酸最佳取样量为1.5mL。该测定方法准确，简单，具有较高的重现性。
参考文献
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海： 上海科学技术出版社，1999.
[2]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[M].贵阳：贵州科技出版社，2003：234.
[3]孙振学.刺楸的化学成分及总皂苷的含量测定研究[D].长春： 吉林大学，2008.
[4]孙文基，张登科.刺楸根皮中皂苷的化学成分研究[J].药学学报，1990， 25（1）：29-34.
[5]朱玮，贾夏，张鞍灵，等.刺楸属植物化学成分及生物活性研究进展[J].西北林学院学报，2004，19（3）：119-124.
[6]倪晓霓，方缘源.HPLC法测定刺楸茎枝中常春藤皂苷元的含量[J].药学研究，2017，36（8）：443-445.
[7]陈晓青，蒋新宇，刘佳佳，等.中草药成分分离分析技术与方法[M].北京：化学工业出版社，2006：187-189.
【关键词】 刺楸皮;常春藤皂苷元;高效液相色谱法;含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）12-0039-03
本品为五加科植物 Kalopanax septemlobus （Thunb.） Koidz.的干燥树皮，全年均可采收。贵州民间常用于治疗腰膝肩臂疼痛、风湿痹痛、跌打损伤等[1-2]，目前收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中，但该标准仅从性状和显微鉴别对其进行质量控制，为完善质量标准，达到有效控制药材质量的目的，更好地发挥其治疗作用，保障用药的安全、稳定及有效，需要对刺楸皮进行深一步的研究。据文献报道刺楸中的皂苷成分主要为刺楸皂苷A，其水解产物常春藤皂苷元、阿拉伯糖及鼠李糖[3-4]。常春藤皂苷元是刺楸皮中主要活性成分，具有保肝、抗肿瘤、止痛、止痉、抗真菌、杀虫等多种药理活性[5-6]，与刺楸皮的临床疗效具有相关性。因此采用高效液相色谱对刺楸皮中常春藤皂苷元进行含量测定，以达到完善质量标准及用药的安全性和稳定性的目的，为全面评价刺楸皮药材质量提供参考。
1 材料
1.1 仪器 Ultimate 3000 高效液相色谱仪（美国），KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），METTLER TOLEDO MS204TS 万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）
1.2 试药与试剂 乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸、盐酸均为分析纯，水为超纯水。刺楸皮3批样品;常春藤皂苷元（批号：11733-201205，质量分数98.3%）中国食品药品检定研究院提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸（60∶40）为流动相;检测波长为210nm;柱温：30℃;流速：1.0mL/min，进样量：10μL。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取常春藤皂苷元对照品20.29mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1mL至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液﹙81.16μg/mL﹚。
2.3 供试品溶液的制备方法 取过三号筛的粉末约 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%的甲醇25mL，加热回流30min，滤过，精密量取续滤液10mL置具塞锥形瓶中，加入1.5mL盐酸，加热回流2h，取下，放冷，转移至25mL容量瓶中，用75%的甲醇定容至25mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 系统适应性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液，照“色谱条件”项下进样，记录色谱图，结果供试品与对照品在对应的位置出现色谱峰。色谱图见图1。
2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下对照品溶液2μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL注入高效液相色谱仪器， 测定峰面积。计算回归方程： y=6.7155x-0.0013，r=0.9999﹙n=6﹚，表明常春藤皂苷元在0.1632～2.0400μg的进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验 取“2.2”项下的对照品溶液，连续进样6次，进样量10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算其RSD为0.46%，结果表明，仪器精密度好。
2.7 稳定性试验 取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别于0，2h，4h，6h，8h，10h，24h各进样10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算RSD为0.95%，结果表明，供试品在24h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一批样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备6份供试品溶液，进样量10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，平均含量13.1470/g，计算其RSD为0.62%，表明该方法重现性好。
2.9 加样回收率试验 取已测定含量的刺楸皮样品（平均含量13.1470mg/g）约0.25g，精密称定，置于三角烧瓶中，分别精密加入常春藤皂苷元量对照品溶液（0.1058mg/mL）25mL，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，计算常春藤皂苷元的平均回收率99.19%，RSD为1.18%。见表1。
2.10 不同色谱柱的考察 取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别以不同品牌C18色谱柱（赛默飞Acclaim 120、依利特Hypersil ODS2、安捷伦Eclipse XDB-C18）各进样10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算含量，RSD为0.48%，结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无显著差异。
2.11 不同流速的考察 取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别以流速（0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min）各进样10μL，测定常春藤皂苷元的峰面积，计算含量，RSD为0.60%。
2.12 范围 按正常测定取样量的80%和120%取样测定，考察在高低取样量测定的精密度。取同一样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别以不同取样量（0.4g、0.5g、0.6g）各进样10μL，測定常春藤皂苷元的峰面积，计算含量，RSD为0.68%。
2.14 样品含量测定 按上述色谱条件，取刺楸皮“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，测定常春藤皂苷元的含量，结果表2。
3 讨论
常春藤皂苷元属于齐墩果烷型五环三萜类化合物，一般可溶于水，易溶于热水、热甲醇及热乙醇，不溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂[6]。利用常春藤皂苷元在甲醇中有较好的溶解度这一特性，选择甲醇作为提取溶剂，再使用盐酸酸水解进一步的提取皂苷元成分，通过本试验筛选出最佳的甲醇浓度为75%，提取方法为回流，盐酸最佳取样量为1.5mL。该测定方法准确，简单，具有较高的重现性。
参考文献
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海： 上海科学技术出版社，1999.
[2]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准[M].贵阳：贵州科技出版社，2003：234.
[3]孙振学.刺楸的化学成分及总皂苷的含量测定研究[D].长春： 吉林大学，2008.
[4]孙文基，张登科.刺楸根皮中皂苷的化学成分研究[J].药学学报，1990， 25（1）：29-34.
[5]朱玮，贾夏，张鞍灵，等.刺楸属植物化学成分及生物活性研究进展[J].西北林学院学报，2004，19（3）：119-124.
[6]倪晓霓，方缘源.HPLC法测定刺楸茎枝中常春藤皂苷元的含量[J].药学研究，2017，36（8）：443-445.
[7]陈晓青，蒋新宇，刘佳佳，等.中草药成分分离分析技术与方法[M].北京：化学工业出版社，2006：187-189.