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摘 要：目的：探究鱼皮低聚肽（FOPs）对酒精损伤小鼠肝功能及糖脂代谢的影响。方法：将60只KM小鼠作为研究对象分为空白组（蒸馏水）、模型组（蒸馏水）、阳性组（水飞蓟素，200 mg/kg BW）、FOPs组（250、500、1 000 mg/kg BW）。实验第33天灌胃制ALD模型。对小鼠各相关联指标（肝功能、血糖、血脂和氧化）的含量和活性进行检测，并量化分析肝组织的脂滴情况进行。结果：FOPs氨基酸的成分组成甘氨酸（Gly）含量最高，其中90.61%均为低于1 000 U的小肽;FOPs各剂量组小鼠血清的肝功能指标AST、ALT活力和血脂TG、TC含量显著降低（P<0.05），250、500 mg/kg BW FOPs的TC含量略低于阳性组;FOPs 各剂量组与模型组比较，肝脏合成蛋白指标TP、ALB含量随浓度的增加而升高，FOPs（250、1 000 mg/kg BW）组血糖GLU含量则明显增高（P<0.05）;250、1 000 mg/kg BW剂量组肝组织过氧化指标MDA含量显著降低（P<0.05），FOPs各剂量组肝组织抗氧化指标GSH活性明显增高，甚至优于空白组，与模型组相比差异显著（P<0.05）。小鼠肝组织油红O染色表明，FOPs缓解小鼠急性酒精肝细胞损伤的脂肪病变程度显著（P<0.05）。结论：FOPs在急性乙醇小鼠的肝功能损伤和糖脂代谢方面方面具有良好的保护功能。
关键词：鱼皮低聚肽（FOPs）;乙醇;急性肝损伤;保肝功能
3～9个氨基酸单体经过组合构成了蛋白质的前体，而这所谓的蛋白质前体也被称作低聚肽，食物蛋白质在蛋白酶的酶解后，即可生成这种3～9个氨基酸残基的物质[1-2]。低聚肽不仅具有比原蛋白、游离的氨基酸更容易被人体吸收的特征，还具有很多生理活性。鱼皮低聚肽（FOPs）是一种运用生物酶解技术经过鱼皮中提取并制备出来的小分子的活性肽生物物质，平均分子量低于1 000D[3]。该小分子肽的氨基酸组成不仅均衡、全面，还含有多种如缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸及赖氨酸等必需氨基酸[4]。研究表明，FOPs在给予机体不断地提供氮源的同时，还具备了免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、改善皮肤水分等生理活性[5-7]。近年来，来源于可食用物质的外源性活性肽由于其在多方面生理活性中的重要性，成为了各界的研究热点[8]。
作为分解代谢环节重要的器官——肝脏，过度甚至是有害的饮酒习惯均极易造成肝脏损伤，该类情况引起的一系列疾病称作酒精性肝病（ALD）[9-10]。由于人们对酒精的随意使用和相对依赖，使之仅次于病毒性肝炎成为第二大肝脏性疾病[11]。经过文献搜索发现，FOPs对酒精性急性肝损伤及其机制的深入研究鲜有报道。在急性肝损伤模型中，酒精一次性大量摄入性肝损伤模型最接近于人类豪饮所致肝损伤的ALD早期损伤特点[12]，所以本研究拟通过FOPs，对小鼠进行乙醇急性肝损伤研究，通过这种急性模型的刺激和效果评估，以期评价并确定FOPs的肝功能相关指标，从而为FOPs的保肝功能的有效干预提供有益且可靠的依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级昆明系（KM）雌性小鼠，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，6～8周龄，体重18～22 g，共计60只。动物合格证：SCXK（京）2016-0011。
1.2 材料与试剂
FOPs，中食海氏生物技术有限公司;水飞蓟素，Sigma公司;乙醇，95%，分析纯，天津致远化学试剂公司;MDA、GSH检测试剂盒，南京建成科技有限公司;AST、ALT、TP、ALB、GLU、TG、TC检测试剂盒，北京和光纯药工业株式会社提供。
1.3 主要仪器与设备
高速离心机，德国 Eppendorf、Omega全自动多功能酶标仪，德国 BMG LABTECH、7080全自动生化仪，日本日立、冰冻切片机CM1850，德国Lecia、Ti-S荧光倒置显微镜，日本Nikon。
1.4 方法与指标
1.4.1 FOPs氨基酸组成及相对分子量分布 相对分子量分布检测采用高效液相色谱凝胶法[13];GB 5009.124—2016食品中氨基酸的测定方法检测氨基酸的组成[14]。
1.4.2 动物分组及造模方法 按体重将60只适应饲养5 d后小鼠随机分为空白、模型、阳性和FOPs低、中、高剂量组（250、500、1 000 mg/kg BW），每组10只。阳性组为每日200 mg/kg BW水飞蓟素，空白和模型组给予等量纯净蒸馏水，按照0.1 mL/10 g标准连续灌胃32 d，并根据每周体重变化量调整灌胃体积。除空白组继续给予等量纯净蒸馏水外，其他5组均于第33天，50%乙醇，0.13 mL/10 g灌胃复制造模，并于禁食、自由进水16 h后，小鼠摘眼球取血，4 000 r/min 离心 15 min 分离血清，吸取上清液保存，完整剥离处死小鼠肝脏并去除脂肪组织和胆囊称取重量，计算其肝重指数。小鼠肝脏左叶干净剖取后切片，镜检下观察脂滴情况;另取剩余部分制成10%的肝组织匀浆。
1.4.3 指标（1）肝重指数的计算 待完整干净的剥离动物肝脏后，对表面的血污进行冲洗，吸干表面多余水分后，称重，计算肝重指数。（2）小鼠血清和肝脏相关联指标检测 对血清中肝功能指标ALT、AST、TP、ALB、血糖GLU和血脂TG、TC指标进行测定，对10%肝组织氧化指标MDA、GSH进行检测。（3）小鼠肝脏油红O染色切片观察 乙醇致毒小鼠的肝脏内脂滴情况及其评分标准参照《保健食品检验与评价技术规范-2003》进行量化。
肝重指数（%）=肝臟重量（g）/小鼠终体质量（g）*100[15]
1.5 数据分析
SPSS 22.0统计软件对实验数据进行处理和分析，结果用±s表示;采用单因素方差分析法对组间数据进行差异比较，P<0.05、P<0.01表示差异有统计学意义。 [25]Rasool M，WKhan S R，Malik A，et al.Comparative studies of salivary and blood sialic acid，lipid peroxidation and antioxidative status in oral squamous cell carcinoma（OSCC）[J].Pakistan Journal of Medical Sciences，2014，30（3）：466-471.
[26]丁荣荣，姜启兴，王 斌，等.壳寡糖对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用[J].食品科学，2019，40（13）：161-165.
Protective Effect of Fish Skin Oligopeptides on Acute Hepatic Injury Induced in Mice
CHEN Di，YIN Ji-yong，HUANG Jian
（National Institute for Nutrition and Health，Chinese Center for Disease Control and Prevention/Key Laboratory of Trace Element Nutrition of National Health Commission of People’s Republic of China，Beijing 100050，China）
Abstract：【Objective】 To investigate the effects of Fish skin oligopeptides（FOPs）on liver function and glucose and lipid metabolism in mice with alcohol injury.【Method】 Totally 60 KM mice were divided into blank（distilled water），model（distilled water），positive group（silymarin，200 mg/kg BW）and FOPs groups（250，500，1 000 mg/kg BW）.On the 33rd day，the ALD model was made by gavage.The content and activity of the relevant indicators（liver function，blood sugar，blood lipid and oxidation）of the mice were detected，and the lipid droplets in the liver tissue were quantitatively analyzed.【Result】 The contents of glycine（Gly）in FOPS amino acids were the highest，90.61% of which were small peptides less than 1 000 U.The activities of AST and ALT and the contents of TG and TC in serum of mice in FOPs were significantly decreased（P<0.05），The content of TC in 250 and 500 mg/kg BW FOPs was slightly lower than that of positive group.Compared with model group，the contents of TP and Alb in FOPs increased with the increase of concentration，while the content of GLU in 250 and 1 000 mg/kg BW groups was significantly increased（P<0.05）.The content of MDA in liver tissue in 250 and 1 000 mg/kg BW groups was significantly decreased（P<0.05），while the activity of GSH in FOPS groups was significantly higher，even better than that of blank group，and the difference was significant compared with model group（P<0.05）.Oil red O staining of mice liver tissue showed that FOPs significantly alleviated the degree of fatty lesions in mice with acute alcoholic liver cell injury（P<0.05）.【Conclusion】 FOPS has a good protective effect on liver function injury and glycolipid metabolism in acute ethanol mice.
Keywords：FOPs;ethanol;acute liver injury;liver protection function
基金項目：国家重点研发计划（项目编号：2016YFD0400602）。
作者简介：陈 頔（1985— ），女，硕士，助理研究员，研究方向：营养干预。
通信作者：黄 建（1969— ），男，研究员，研究方向：营养干预。
关键词：鱼皮低聚肽（FOPs）;乙醇;急性肝损伤;保肝功能
3～9个氨基酸单体经过组合构成了蛋白质的前体，而这所谓的蛋白质前体也被称作低聚肽，食物蛋白质在蛋白酶的酶解后，即可生成这种3～9个氨基酸残基的物质[1-2]。低聚肽不仅具有比原蛋白、游离的氨基酸更容易被人体吸收的特征，还具有很多生理活性。鱼皮低聚肽（FOPs）是一种运用生物酶解技术经过鱼皮中提取并制备出来的小分子的活性肽生物物质，平均分子量低于1 000D[3]。该小分子肽的氨基酸组成不仅均衡、全面，还含有多种如缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸及赖氨酸等必需氨基酸[4]。研究表明，FOPs在给予机体不断地提供氮源的同时，还具备了免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、改善皮肤水分等生理活性[5-7]。近年来，来源于可食用物质的外源性活性肽由于其在多方面生理活性中的重要性，成为了各界的研究热点[8]。
作为分解代谢环节重要的器官——肝脏，过度甚至是有害的饮酒习惯均极易造成肝脏损伤，该类情况引起的一系列疾病称作酒精性肝病（ALD）[9-10]。由于人们对酒精的随意使用和相对依赖，使之仅次于病毒性肝炎成为第二大肝脏性疾病[11]。经过文献搜索发现，FOPs对酒精性急性肝损伤及其机制的深入研究鲜有报道。在急性肝损伤模型中，酒精一次性大量摄入性肝损伤模型最接近于人类豪饮所致肝损伤的ALD早期损伤特点[12]，所以本研究拟通过FOPs，对小鼠进行乙醇急性肝损伤研究，通过这种急性模型的刺激和效果评估，以期评价并确定FOPs的肝功能相关指标，从而为FOPs的保肝功能的有效干预提供有益且可靠的依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级昆明系（KM）雌性小鼠，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，6～8周龄，体重18～22 g，共计60只。动物合格证：SCXK（京）2016-0011。
1.2 材料与试剂
FOPs，中食海氏生物技术有限公司;水飞蓟素，Sigma公司;乙醇，95%，分析纯，天津致远化学试剂公司;MDA、GSH检测试剂盒，南京建成科技有限公司;AST、ALT、TP、ALB、GLU、TG、TC检测试剂盒，北京和光纯药工业株式会社提供。
1.3 主要仪器与设备
高速离心机，德国 Eppendorf、Omega全自动多功能酶标仪，德国 BMG LABTECH、7080全自动生化仪，日本日立、冰冻切片机CM1850，德国Lecia、Ti-S荧光倒置显微镜，日本Nikon。
1.4 方法与指标
1.4.1 FOPs氨基酸组成及相对分子量分布 相对分子量分布检测采用高效液相色谱凝胶法[13];GB 5009.124—2016食品中氨基酸的测定方法检测氨基酸的组成[14]。
1.4.2 动物分组及造模方法 按体重将60只适应饲养5 d后小鼠随机分为空白、模型、阳性和FOPs低、中、高剂量组（250、500、1 000 mg/kg BW），每组10只。阳性组为每日200 mg/kg BW水飞蓟素，空白和模型组给予等量纯净蒸馏水，按照0.1 mL/10 g标准连续灌胃32 d，并根据每周体重变化量调整灌胃体积。除空白组继续给予等量纯净蒸馏水外，其他5组均于第33天，50%乙醇，0.13 mL/10 g灌胃复制造模，并于禁食、自由进水16 h后，小鼠摘眼球取血，4 000 r/min 离心 15 min 分离血清，吸取上清液保存，完整剥离处死小鼠肝脏并去除脂肪组织和胆囊称取重量，计算其肝重指数。小鼠肝脏左叶干净剖取后切片，镜检下观察脂滴情况;另取剩余部分制成10%的肝组织匀浆。
1.4.3 指标（1）肝重指数的计算 待完整干净的剥离动物肝脏后，对表面的血污进行冲洗，吸干表面多余水分后，称重，计算肝重指数。（2）小鼠血清和肝脏相关联指标检测 对血清中肝功能指标ALT、AST、TP、ALB、血糖GLU和血脂TG、TC指标进行测定，对10%肝组织氧化指标MDA、GSH进行检测。（3）小鼠肝脏油红O染色切片观察 乙醇致毒小鼠的肝脏内脂滴情况及其评分标准参照《保健食品检验与评价技术规范-2003》进行量化。
肝重指数（%）=肝臟重量（g）/小鼠终体质量（g）*100[15]
1.5 数据分析
SPSS 22.0统计软件对实验数据进行处理和分析，结果用±s表示;采用单因素方差分析法对组间数据进行差异比较，P<0.05、P<0.01表示差异有统计学意义。 [25]Rasool M，WKhan S R，Malik A，et al.Comparative studies of salivary and blood sialic acid，lipid peroxidation and antioxidative status in oral squamous cell carcinoma（OSCC）[J].Pakistan Journal of Medical Sciences，2014，30（3）：466-471.
[26]丁荣荣，姜启兴，王 斌，等.壳寡糖对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用[J].食品科学，2019，40（13）：161-165.
Protective Effect of Fish Skin Oligopeptides on Acute Hepatic Injury Induced in Mice
CHEN Di，YIN Ji-yong，HUANG Jian
（National Institute for Nutrition and Health，Chinese Center for Disease Control and Prevention/Key Laboratory of Trace Element Nutrition of National Health Commission of People’s Republic of China，Beijing 100050，China）
Abstract：【Objective】 To investigate the effects of Fish skin oligopeptides（FOPs）on liver function and glucose and lipid metabolism in mice with alcohol injury.【Method】 Totally 60 KM mice were divided into blank（distilled water），model（distilled water），positive group（silymarin，200 mg/kg BW）and FOPs groups（250，500，1 000 mg/kg BW）.On the 33rd day，the ALD model was made by gavage.The content and activity of the relevant indicators（liver function，blood sugar，blood lipid and oxidation）of the mice were detected，and the lipid droplets in the liver tissue were quantitatively analyzed.【Result】 The contents of glycine（Gly）in FOPS amino acids were the highest，90.61% of which were small peptides less than 1 000 U.The activities of AST and ALT and the contents of TG and TC in serum of mice in FOPs were significantly decreased（P<0.05），The content of TC in 250 and 500 mg/kg BW FOPs was slightly lower than that of positive group.Compared with model group，the contents of TP and Alb in FOPs increased with the increase of concentration，while the content of GLU in 250 and 1 000 mg/kg BW groups was significantly increased（P<0.05）.The content of MDA in liver tissue in 250 and 1 000 mg/kg BW groups was significantly decreased（P<0.05），while the activity of GSH in FOPS groups was significantly higher，even better than that of blank group，and the difference was significant compared with model group（P<0.05）.Oil red O staining of mice liver tissue showed that FOPs significantly alleviated the degree of fatty lesions in mice with acute alcoholic liver cell injury（P<0.05）.【Conclusion】 FOPS has a good protective effect on liver function injury and glycolipid metabolism in acute ethanol mice.
Keywords：FOPs;ethanol;acute liver injury;liver protection function
基金項目：国家重点研发计划（项目编号：2016YFD0400602）。
作者简介：陈 頔（1985— ），女，硕士，助理研究员，研究方向：营养干预。
通信作者：黄 建（1969— ），男，研究员，研究方向：营养干预。