【摘 要】
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目的 探讨柯萨奇病毒B3(CoxsackieviruB3,CVB3)感染大鼠心室肌钙通道的基因表达特点及其功能改变.方法 取1?3日龄新生SD大鼠15只行心室肌细胞原代培养,将培养48 h且已形成规
【机 构】
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河北医科大学第四医院心内科,河北石家庄050011
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目的 探讨柯萨奇病毒B3(CoxsackieviruB3,CVB3)感染大鼠心室肌钙通道的基因表达特点及其功能改变.方法 取1?3日龄新生SD大鼠15只行心室肌细胞原代培养,将培养48 h且已形成规律搏动的心室肌细胞随机分为病毒感染组(CVB3株感染培养,n=8)与正常对照组(n=7),比较两组大鼠的细胞形态、结构变化特点等;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组大鼠L型钙通道亚单位mRNA的表达;应用全细胞膜片钳技术对CVB3感染前后心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)变化进行测定,记录细胞膜电容(Cm)、电流密度、电压依赖性激活与失活等动力学参数.结果 正常心室肌细胞主要表现为三角形、梭形、多边形等形态,搏动规律有力,搏动细胞百分比＞95％;接种CVB3培养3d后细胞搏动开始减慢且呈不规律搏动,细胞变圆、扁梭,折光性增强,最终停止搏动、脱落、死亡;CVB3感染3d后,溶酶体增多,线粒体空泡变形,细胞核肿胀,核膜破裂.病毒感染组心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA表达水平分别为(4.02±0.07)、(2.08±0.06)均高于正常对照组(P＜0.05);而两组α2/δ亚单位mRNA表达水平差异无统计学意义.在-20?+10 mV测试电压下,病毒感染组ICa-L密度为(-8.65±0.99),较正常对照组明显增加(P＜0.05);但CVB3感染培养对大鼠心室肌细胞Cm、电压依赖性激活与失活特性无显著影响.病毒接种后第4天,病毒感染组CVB3特异蛋白基因片段RNA均为阳性,正常对照组CVB3特异蛋白基因片段RNA均为阴性,差异有统计学意义(P＜0.05),病毒感染组病毒接种1?4 d CK-MB浓度均高于正常对照组(P＜0.05).结论 CVB3感染大鼠心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA表达上调,ICa-L密度增大,可能是CVB3感染对心室肌细胞产生损伤作用的病理机制.
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