登革热病毒Ⅰ型外膜蛋白DⅢ区的克隆、表达及重组蛋白的应用

来源 :中国人兽共患病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kusoyi
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目的选取DVⅠ外膜蛋白DⅢ区基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断的纯化重组蛋白。方法用RT-PCR和套式PCR法扩增登革病毒Hawaii株外膜蛋白DⅢ区基因,与表达载体pET-30a连接,构建重组表达载体。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,重组蛋白经Western—blot鉴定活性后用电洗脱法进行纯化。纯化的重组蛋白用间接ELISA法和捕获ELISA法应用于血清学检测,检测结果与间接免疫荧法进行比较。结果重组表达质粒在大肠杆菌中表达高产量的重组蛋白,Western—blot结果显示重组蛋白
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