【摘 要】
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目的 探讨内皮祖细胞来源小细胞外囊泡(endothelial progenitor cells derived small extracellular vesicles,EPCs-sEVs)对小鼠脊髓损伤的治疗效果.方法 取20 只C57BL/6 雄
【机 构】
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上海交通大学附属第六人民医院骨科 上海200233
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目的 探讨内皮祖细胞来源小细胞外囊泡(endothelial progenitor cells derived small extracellular vesicles,EPCs-sEVs)对小鼠脊髓损伤的治疗效果.方法 取20 只C57BL/6 雄性小鼠股骨及胫骨骨髓分离培养EPCs,采用双荧光染色及流式细胞术鉴定;然后对EPCs进行传代,收集P2～P4代细胞上清,以超速离心法提取EPCs-sEVs,采用透射电镜、纳米流式检测仪及Western blot进行鉴定.取40 只C57BL/6 雌性小鼠随机分为4组(n=10),其中假手术组仅切除T10 椎板,模型组以及低、高浓度干预组制备T10 脊髓损伤模型;模型制备后30 min、3 d 及7d低、高浓度干预组经尾静脉分别注射浓度为1×109、1×1010个/mL 的EPCs-sEVs.术后行小鼠行为学检测(BMS评分、斜板实验、Von Frey实验),术后4周取材行大体、HE染色及免疫组织化学染色观察脊髓组织结构变化.另取3 只C57BL/6雌性小鼠制备T10脊髓损伤模型后,经尾静脉注入DiR标记的EPCs-sEVs,30 min后活体成像仪观察EPCs-sEVs 是否达脊髓损伤部位.结果 经鉴定,成功获取小鼠骨髓来源的EPCs 及EPCs-sEVs;活体成像仪观察显示EPCs-sEVs 在注射后30 min 内募集至脊髓损伤区域.行为学检测示,术后2 周内两干预组BMS 评分及斜板实验最大角度与模型组比较差异均无统计学意义(P＞0.05),2 周后均明显优于模型组(P＜0.05);术后4周两干预组Von Frey实验示机械痛阈值明显高于模型组、低于假手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05);上述指标两干预组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与模型组相比,两干预组损伤节段脊髓组织缺损较小,单个核细胞浸润较少,组织结构恢复明显,血管新生更多(P＜0.05);两干预组间无明显差异.结论 EPCs-sEVs 可促进小鼠脊髓损伤修复,为脊髓损伤的生物治疗提供了新的方案.
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