水中有毒蓝藻的荧光定量PCR检测法

来源 :环境与健康杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的建立水中有毒蓝藻的荧光定量PCR检测方法。方法取20 ml纯培养藻液和500 ml采集水样用0.22μm滤膜进行过滤,收集藻体提取DNA,应用SYBR Green对微囊藻毒素合成酶基因mcy A进行实时荧光定量PCR检测,根据软件获取的以模板标准品与Ct值建立的标准曲线,计算样品中的mcy A基因拷贝数和产微囊藻毒素(MC)的蓝藻的浓度。结果在13.8~1.38×106拷贝/L的线性范围内,所得回归方程为y=-3.45 lgx+36.2,r=0.989 9。方法检出限为10.7拷贝/L,加标回收率为88.4%~106.0%,RSD为3.6%~4.0%。应用该方法和传统的显微镜检法对实验室纯培养产毒铜绿微囊藻的检测结果呈正相关(r=0.994 0,P<0.05)。结论该方法灵敏度高、精确度高、检测范围宽、重复性好,适合用于蓝藻水华暴发的早期预警。 Objective To establish a fluorescence quantitative PCR method for detecting toxic cyanobacteria in water. Methods Twenty ml pure cultures of algae and 500 ml water samples were collected and filtered through a 0.22 μm membrane filter. The algae were collected for DNA extraction. SYBR Green was used to detect microcystin synthase gene mcy A by real-time fluorescence quantitative PCR. The standard curve established with the template standard and the Ct value was obtained and the copy number of mcy A gene and the concentration of cyanobacteria producing microcystin (MC) in the sample were calculated. Results in the linear range of 13.8 ~ 1.38 × 106 copies / L, the regression equation was y = -3.45 lgx +36.2, r = 0.989 9. The detection limit of the method was 10.7 copies / L, the spiked recoveries ranged from 88.4% to 106.0% and RSD from 3.6% to 4.0%. There was a positive correlation between the method and the conventional microscopy on the detection of laboratory-grown toxin-producing Microcystis aeruginosa (r = 0.994 0, P <0.05). Conclusion The method has high sensitivity, high precision, wide detection range and good repeatability. It is suitable for early warning of cyanobacteria blooms.
其他文献
制图课教学目的是让学生掌握,并综合应用制图基本理论、基本方法,培养学生读图和绘图的能力.传统的教学方式是灌输式的,有碍于学生创新意识的形成,必须进行改革.要从多方位提
天王桃是近几年由昌黎果树研究所培育出来的桃家族的一个新品种.目前,以其果个特大、品质优良、成熟期晚、错季上市、极耐贮运而深受生产者和消费者们的喜爱.
“音×色--2005索尼Network Walkman新品发布会”于4月4日在北京富力会举行.索尼(中国)有限公司宣布推出2005 Network Walkman(网络随身听)新品系列,包括第一次面向中国市场
坤泥沟子已列入肇东市水土保持重点治理区。分析了该流域水土流失的原因、危害 ,提出了防治对策 Kun mud ditch has been included in Zhaodong water and soil conservatio
引起医院内感染的因素很多,而手卫生是其中很重要的一个因素,从我国卫生部网站获得的数据表明,我国每年约400万病人发生医院感染,直接导致的经济损失达到160亿至240亿元人民
6分钟的战斗  2002年8月8日7时24分,金川集团股份有限公司消防大队(以下简称消防大队)接到二矿区井下1000 m中段发生矿运卡车着火的报警,立即出动消防车6辆赶到斜坡道口,向二
日前,由环保部科技标准司组织制定、由中钢集团马鞍山矿山研究院有限公司(国家环境保护矿山固体废物处理与处置工程技术中心)等6家单位共同起草的《矿山生态环境保护与恢复治理
以某煤化工项目为研究对象,对煤气化封闭框架内的火灾自动报警探测器进行选型分析,提出合理建议和方案,以实现防火安全目标。 Taking a coal chemical project as the resea
草樱花 ( P.subulata L .) ,又名丛生福禄考、芝樱花 ,为花艹忍科福禄考属多年生草本。河北省林业科学院 1 998年从日本引进白色、粉色、粉红 3个草樱花品种 ,经过几年的繁殖
Cirrus Logic公司最新推出的音频系统系列处理器融合了其面向联网式数字音频市场的CobraNetTM技术,极大地降低了专业音频设备制造商的系统成本.