【摘 要】
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目的:克隆小鼠牙本质磷蛋白(DPP)CDNA.方法:用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总RNA,用OLIGO(DT) 作引物逆转录合成牙胚CDNA,然后利用PCR 方法,从CDNA 中扩增出小鼠DPP
【机 构】
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第四军医大学口腔医学院;中国科学院细胞生物学研究所
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目的:克隆小鼠牙本质磷蛋白(DPP)CDNA.方法:用异硫氰酸胍一步法从小鼠牙胚组织中抽提总RNA,用OLIGO(DT) 作引物逆转录合成牙胚CDNA,然后利用PCR 方法,从CDNA 中扩增出小鼠DPPCDNA基因片段( 约1 .6KB),将所得基因片段插入PBLUESCRIPT 质粒载体,转化到大肠杆菌XL1 － BLUE 后挑选阳性克隆,提取重组质粒DNA,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆.结果:酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致.结论:克隆到小鼠DPPCDNA 基因片段.“,”Aim:To clone and partially sequencing mouse dentin phosphoprotein cDNA. Methods: In the study, total RNA was extracted from the mouse tooth germs by acid guanidinium thiocyanata-phenol-chloroform method, the desired DNA product was obtained from the total RNA by RT-PCR with the primers including oligo(dt) and two gene specific primers. The segment(about 1.6kb) was inserted into pBluescript vector and the interesting plasmid was transformed into E. Coli host strain XL1-Blue. The double-stranded DNA of the positive clone was analyzed by restriction endoncuclease mappping and DNA sequencing. Results: The restriction endonuclease map and sequence of mouse DPP cNDA in this study were consistent with those in the references published. Conclusons: The mouse DPP cDNA was obtained for further research.
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