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摘要：目的：探讨蛋白酪氨酸激酶PTK7在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义，分析PTK7表达在卵巢浆液性肿瘤中的诊断及预后价值。方法：制备卵巢癌细胞系HO8910、SKOV3、A2780爬片，并收集我院76例卵巢浆液性肿瘤库存标本蜡块，采用免疫组化Elivision两步法检测PTK7蛋白的表达情况。结果：PTK7在卵巢癌细胞株HO8910及A2780中呈阴性表达，在SKOV3中成弱阳性表达;PTK7在卵巢浆液性肿瘤和正常输卵管上皮的表达均位于细胞质中。另外PTK7在正常输卵管上皮、交界性浆液性肿瘤和良性浆液性肿瘤中的阳性表达主要为弥漫性表达。PTK7在浆液性卵巢癌中仅有1例呈颗粒性阳性表达，其余均为弥漫性表达;蛋白酪氨酸激酶PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率呈现逐渐降低趋势，差异有统计学意义（P<0.05），因此PTK7可能具有抑制卵巢上皮性浆液性肿瘤癌基因表达的作用。结论：蛋白酪氨酸激酶PTK7在输卵管正常上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤和浆液性癌中表达呈逐渐下降趋势，PTK7可能成为未来辅助诊断卵巢浆液性肿瘤的重要指标，对卵巢浆液性肿瘤患者的临床预后具有重要指示作用。
关键词：蛋白酪氨酸激酶;PTK7基因;卵巢浆液性肿瘤
卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，该病病死率位居女性恶性肿瘤首位，浆液性卵巢癌在上皮性卵巢癌中占较大比例，是晚期患者病死的主要肿瘤类型之一[1]。浆液性卵巢癌具有复发率高，预后差等特点，严重危及患者的生命安全。因此探究卵巢浆液性癌的发病原因、发病机制、寻找早期肿瘤标志物是妇科肿瘤领域研究的热点之一。
1资料与方法
1.1标本与来源
1.1.1细胞爬片 卵巢癌细胞系HO8910、SKOV3、A2780均购自中科院生物化学与细胞生物学研究所细胞库，上述卵巢器细胞系均采用胎牛血清培养基进行常规培养，细胞贴附于盖玻片制成单层细胞爬片。
1.1.2 石蜡组织切片 收集我院2010年1月至2015年1月的10例正常输卵管组织蜡块，66例卵巢浆液性肿瘤库存标本蜡块分为4组，对照组中12例正常输卵管上皮组织，4例卵巢浆液性囊腺瘤组织，26例交界性浆液性卵巢肿瘤组织，24例浆液性肿瘤组织，上述均有相对完整的病历资料。
1.2 抗体与试剂 兔抗人PTK7多克隆抗体、PBS缓冲液、 3%过氧化氢去离子水、EliVision试剂盒、DAB显色液及多聚赖氨酸溶液。
1.3 检测方法与步骤
1.3.1 石蜡切片 脱蜡和用PH为6.0的柠檬酸抗原进行常规修复后，应用3% 的过氧化氢离子水封闭10min后，用PBS溶液清洗，滴加一抗温育1h，PBS清洗，滴加二抗20min，PBS清洗，行DAB显色，苏木素复染，然后封片。
1.3.2 细胞爬片 采用3%过氧化氢去离子水封闭10 min，PBS清洗，滴加一抗，温育1h，PBS清洗，滴加二抗20min，PBS清洗，行DAB显色和苏木素复染后封片[2]。
1.4 结果判定 免疫组织化学结果：细胞质内见棕黄色颗粒即为阳性。染色程度：棕黄色为3分，黄色为2分，淡黄色为1分，基本不着色0分。按细胞数量分为：阳性细胞数0%位0分，<10%为1分，10%～50%为2分，50%～80%为3分，>80%为4分，根据染色程度和染色细胞百分比进行评分。将着色程度与着色细胞数相乘，低于或等于4分者为阴性表达，大于4分者为阳性表达。细胞爬片结果着色为阳性，不着色为阴性。
1.5 统计学方法[4] 采用SPSS17.0统计软件进行数据统计分析，所有数据均以均数（X±s）方式进行表示，组间差异采用 t检验进行比较，P<0.05 表明差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PTK7在卵巢癌细胞系中的表达 PTK7在HO8910中呈阴性表达，在SKOV3中弱阳性表达，在A2780中阴性表达。
2.2 PTK7在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达 PTK7在卵巢浆液性肿瘤和正常输卵管上皮的表达均位于细胞质中。另外PTK7在正常输卵管上皮、交界性浆液性肿瘤和良性浆液性肿瘤中的阳性表达主要为弥漫性表达。PTK7在浆液性卵巢癌中仅有1例呈颗粒性阳性表达，其余均为弥漫性表达。
2.3 PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率比较 蛋白酪氨酸激酶PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率呈现逐渐下降趋势，除正常输卵管上皮与良性浆液性肿瘤、良性浆液性肿瘤与交界性浆液性肿瘤比较无统计学意义外，其他各组两两比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），如表1所示。
表1 PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率比较
3讨论
肿瘤细胞受到一些理化因素的影响，其信号的转导发生混乱。治疗肿瘤过程中选择性地阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号转导通路具有重要意义，蛋白酪氨酸激酶（PTK）就是信号转导通路当中的关键酶[5]。有临床研究表明：PTK7与肿瘤的发生、发展和浸润有密切关系，目前研究开发抑制PTK异常表达的抗肿瘤药物已取得了初步的成果。
本组研究发现，蛋白酪氨酸激酶PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率呈现逐渐下降趋势，差异均具有统计学意义（P<0.05），因此PTK7可能具有抑制卵巢上皮性浆液性肿瘤癌基因表达的作用。
参考文献：
[1] 王海燕， 印永祥， 郭庆等. 蛋白酪氨酸激酶PTK7在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义[J]. 中国癌症杂志， 2014， （7）：481-486.
[2] 文娟娟， 王建东， 王海燕等. EphBl在卵巢浆液性腺癌中的表达及临床意义[J]. 临床肿瘤学杂志， 2014， （1）：34-37.
[3] 郑伟平， 陶萍萍， 王运根. 酪氨酸激酶受体B在肿瘤中的研究进展[J]. 医学研究杂志， 2012， 41（1）：165-168.
[4] 李欣， 高金恒， 陈国良. 蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展[J]. 沈阳药科大学学报， 2011， （12）：1005-1012.
[5] 王勇， 龙亚秋. 蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂的研究新进展[J]. 有机化学， 2011， 31（10）：1595-1606.
关键词：蛋白酪氨酸激酶;PTK7基因;卵巢浆液性肿瘤
卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，该病病死率位居女性恶性肿瘤首位，浆液性卵巢癌在上皮性卵巢癌中占较大比例，是晚期患者病死的主要肿瘤类型之一[1]。浆液性卵巢癌具有复发率高，预后差等特点，严重危及患者的生命安全。因此探究卵巢浆液性癌的发病原因、发病机制、寻找早期肿瘤标志物是妇科肿瘤领域研究的热点之一。
1资料与方法
1.1标本与来源
1.1.1细胞爬片 卵巢癌细胞系HO8910、SKOV3、A2780均购自中科院生物化学与细胞生物学研究所细胞库，上述卵巢器细胞系均采用胎牛血清培养基进行常规培养，细胞贴附于盖玻片制成单层细胞爬片。
1.1.2 石蜡组织切片 收集我院2010年1月至2015年1月的10例正常输卵管组织蜡块，66例卵巢浆液性肿瘤库存标本蜡块分为4组，对照组中12例正常输卵管上皮组织，4例卵巢浆液性囊腺瘤组织，26例交界性浆液性卵巢肿瘤组织，24例浆液性肿瘤组织，上述均有相对完整的病历资料。
1.2 抗体与试剂 兔抗人PTK7多克隆抗体、PBS缓冲液、 3%过氧化氢去离子水、EliVision试剂盒、DAB显色液及多聚赖氨酸溶液。
1.3 检测方法与步骤
1.3.1 石蜡切片 脱蜡和用PH为6.0的柠檬酸抗原进行常规修复后，应用3% 的过氧化氢离子水封闭10min后，用PBS溶液清洗，滴加一抗温育1h，PBS清洗，滴加二抗20min，PBS清洗，行DAB显色，苏木素复染，然后封片。
1.3.2 细胞爬片 采用3%过氧化氢去离子水封闭10 min，PBS清洗，滴加一抗，温育1h，PBS清洗，滴加二抗20min，PBS清洗，行DAB显色和苏木素复染后封片[2]。
1.4 结果判定 免疫组织化学结果：细胞质内见棕黄色颗粒即为阳性。染色程度：棕黄色为3分，黄色为2分，淡黄色为1分，基本不着色0分。按细胞数量分为：阳性细胞数0%位0分，<10%为1分，10%～50%为2分，50%～80%为3分，>80%为4分，根据染色程度和染色细胞百分比进行评分。将着色程度与着色细胞数相乘，低于或等于4分者为阴性表达，大于4分者为阳性表达。细胞爬片结果着色为阳性，不着色为阴性。
1.5 统计学方法[4] 采用SPSS17.0统计软件进行数据统计分析，所有数据均以均数（X±s）方式进行表示，组间差异采用 t检验进行比较，P<0.05 表明差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PTK7在卵巢癌细胞系中的表达 PTK7在HO8910中呈阴性表达，在SKOV3中弱阳性表达，在A2780中阴性表达。
2.2 PTK7在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达 PTK7在卵巢浆液性肿瘤和正常输卵管上皮的表达均位于细胞质中。另外PTK7在正常输卵管上皮、交界性浆液性肿瘤和良性浆液性肿瘤中的阳性表达主要为弥漫性表达。PTK7在浆液性卵巢癌中仅有1例呈颗粒性阳性表达，其余均为弥漫性表达。
2.3 PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率比较 蛋白酪氨酸激酶PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率呈现逐渐下降趋势，除正常输卵管上皮与良性浆液性肿瘤、良性浆液性肿瘤与交界性浆液性肿瘤比较无统计学意义外，其他各组两两比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），如表1所示。
表1 PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率比较
3讨论
肿瘤细胞受到一些理化因素的影响，其信号的转导发生混乱。治疗肿瘤过程中选择性地阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号转导通路具有重要意义，蛋白酪氨酸激酶（PTK）就是信号转导通路当中的关键酶[5]。有临床研究表明：PTK7与肿瘤的发生、发展和浸润有密切关系，目前研究开发抑制PTK异常表达的抗肿瘤药物已取得了初步的成果。
本组研究发现，蛋白酪氨酸激酶PTK7在正常输卵管上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤、浆液性卵巢癌表达的阳性率呈现逐渐下降趋势，差异均具有统计学意义（P<0.05），因此PTK7可能具有抑制卵巢上皮性浆液性肿瘤癌基因表达的作用。
参考文献：
[1] 王海燕， 印永祥， 郭庆等. 蛋白酪氨酸激酶PTK7在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义[J]. 中国癌症杂志， 2014， （7）：481-486.
[2] 文娟娟， 王建东， 王海燕等. EphBl在卵巢浆液性腺癌中的表达及临床意义[J]. 临床肿瘤学杂志， 2014， （1）：34-37.
[3] 郑伟平， 陶萍萍， 王运根. 酪氨酸激酶受体B在肿瘤中的研究进展[J]. 医学研究杂志， 2012， 41（1）：165-168.
[4] 李欣， 高金恒， 陈国良. 蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展[J]. 沈阳药科大学学报， 2011， （12）：1005-1012.
[5] 王勇， 龙亚秋. 蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂的研究新进展[J]. 有机化学， 2011， 31（10）：1595-1606.