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【摘要】 目的 对慢性重型肝炎患者血清sCR1浓度变化进行动态研究,探讨慢性重型肝炎sCR1浓度变化与该病发生、发展及预后的关系,探索预警慢性重型肝炎发生和发展的有效检测指标。方法 选择枣庄市立医院78例慢性重型肝炎、76例慢性肝炎、61例肝硬化患者分别为研究组及28例健康人为对照组,采用酶联免疫夹心法测定血清sCR1, 应用统计学方法比较分析。结果 测定血清sCR1平均值,正常对照组(34.3±9.1)ng/ml慢性肝炎组(72.5±15.3)ng/ml,肝硬化组(91.8±28.1)ng/ml,慢性重型肝炎组(163.2±56.5)ng/ml。慢性重型肝炎及肝硬化患者sCR1浓度≥100ng/ml 90例,<100 ng/ml 59例。结论 慢性重型肝炎患者血清sCR1浓度的变化与肝功能损伤程度密切相关,该指标可作为慢性重型肝炎患者病情严重程度的有效检测指标。
【关键词】 慢性重型肝炎;sCR1;动态变化
The relation of chronic heavy type hepatitis serum sCR1 development change and hepar function loss degree
LIU Ai-xiang,MENG Fan-ke,ZHANG Yu-li,et al.
Zao Zhuang Shi Zhong District people hospita,277100 China
【Abstract】 Objective To resarch chronic heavy type hepatitis patient serum sCR1 thickness change studies , discusses chronic heavy type hepatitis sCR1 thickness change with the effective detecting index owing a disease occurrence , development and the prognosis relation.Methods Chose 78 cases chronic severe hepatitis,76 cases chronic hepatitis,61 cases cirrhosis in our hospital and 28 healthy people who were evaluate serum sCR1 by ELISA.Results Arithmetic weighted mean of serum sCR1 were(34.3±9.1)ng/ml in control group,chronic hepatitis group were(72.5±15.3)ng/ml,cirrhosis group were (91.8±28.1)ng/ml, chronic severe hepatitis group were (163.2±56.5)ng/ml.Conclusion Chronic heavy type hepatitis serum sCR1 development change isclosely related hepar function loss degree.
【Key words】 Chronic heavy type hepatitis sCR1 development change
DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.06.02
作者单位:277100山东省枣庄市立医院检验科
CR1是补体受体的一种,补体受体是细胞表面的重要膜结构。1993年Pascual等[1]报道了一种分子量为200KDa的可溶性CR1(sCR1),存在于正常血浆中,正常值为13~81 ng/ml。血清中sCR1由细胞分泌产生,血液中sCR1的水平与某些疾病具有一定的关联,研究发现sCR1水平升高与机体重要脏器的功能损伤相平行。
慢性重型肝炎,其病死率很高,早期发现和及时治疗是提高重型肝炎患者存活率的关键。因此笔者建立了血清sCR1酶联免疫夹心测定方法,研究慢性重型肝炎血清sCR1动态变化与肝脏功能损伤的程度,笔者对78例慢性重型肝炎患者,76例慢性肝炎患者,以及 61例肝硬化患者进行研究,现报告如下。
1 资料与方法
1.1 标本 本组215例为枣庄市立医院住院患者,均为乙肝病毒感染,男142例,女73例;年龄26~68岁。其中78例慢性重型肝炎、慢性肝炎76例及61例肝硬化患者,慢性肝炎又分为肝功能正常35例和肝功能活动期41例两组。均符合2000年《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准[2],正常对照组28例,均为枣庄血站健康献血员。静脉空腹采血后分离血清,所有血清皆冻存在-20℃冰箱,实验前于37℃解冻。
1.2 方法
1.2.1 免疫试剂 鼠抗人CR1 单抗(IgG1,E11克隆)、碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG、抗体稀释液、标准品、BSA、底物及底物液等由中国免疫学会红细胞免疫专业学组提供。
1.2.2 标本 待测血清皆冻存-20℃,实验前37℃解冻。
1.2.3 细胞制备 将“O”型正常人枸橼酸钠抗凝全血1 ml(在采血当日实验),2000 r/min,离心5 min,取中下层沉淀红细胞10 μl加入到含有等渗盐水的10 ml玻璃试管内混匀,洗涤两次,2000 r/min,离心5 min,保证每次洗涤无红细胞丢失。最后一次洗涤后弃净上清夜,加1%S/BSA90 μl和固定液10 μl,震荡混匀,室温固定30 min。再用5 ml1%S/BSA洗涤一次,弃净上清夜。加1%S/BSA1 ml制成红细胞悬液,4℃保存备用。
1.2.4 测定方法 将标准品(7孔)、空白对照(1孔,用抗体稀释液代替)、待测血清各100 μl加入空白V型板中,加入配制好的定量鼠抗人CR1单克隆抗体10 μl,37℃孵育60 min。每孔加入20 μl定量配制的“O” 红细胞悬液,振板器震荡混匀,37℃孵育30 min。用1%S/BSA洗涤两次,1500 r/min,板式水平离心2 min。每孔加入碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG10 μl,37℃孵育30 min。1%S/BSA洗涤两次。每孔加入120 μl配制好的底物液。37℃孵育30 min。水平离心,吸取上清液显色液100 μl移于另-U型比色板,在酶联免疫检测仪读取数值,同时用标准曲线计算其浓度。
1.2.5 统计学方法 计量资料以(x±s)表示,组间比较采用t检验。所有数据均由Excle處理。两两比较组内各数据间差异的显著性,以P<0.05表示有显著差异。慢性重型肝炎所分两组做动态曲线。
2 结果
2.1 对照组和不同肝病患者血清sCR1、CHE、PT、PTA变化见表1。
表1
对照组和不同肝病患者血清sCR1、CHE、PT、PTA变化(x±s)
分组例数sCR1(ng/ml)CHE(U/L)PT(S)PTA(%)
正常对照2834.3±9.16987.2±2989.312.9±3.1*89.9±15.3
慢性肝炎7672.5±15.34354.5±1891.218.5±3.161.5±17.5*
肝硬化6191.8±28.13678.2±1789.319.1±2.958.3±13.9
慢性重型肝炎78163.2±56.51992.4±1015.328.9±7.828.7±15.8
注:慢性重型肝炎与正常对照组,*P<0.01;与慢性肝炎、肝硬化,#P<0.01
2.2 慢性肝炎对照组所分的肝功能正常和肝功能活动期两组测sCR1含量X,发现两组存在显著性差异。肝功能活动组sCR1水平(102.8±19.8)ng/ml,肝功能正常组sCR1水平(49.2±11.5)ng/ml,肝功能活动组水平明显高与肝功能正常组。
2.3 慢性重型肝炎不同时期血清sCR1浓度的动态变化 作者把78例慢性重型肝炎分为死亡组和存活组。死亡组51例,分为早期、中期、晚期,存活组27例,分为早期、中期、恢复期。对不同时期做血清sCR1浓度测定。发现慢性重型肝炎两组早期中期无显著性差异,晚期与恢复期有高度显著性差异(P<0.01)见表2。
表2
慢性重型肝炎两组不同时期sCR1含量(x±s)
分组例数早期(ng/ml)中期(ng/ml)晚期(ng/ml)恢复期(ng/ml)
死亡组51132.9±43.5218.4±62.7248.7±71.5
存活组27141.2±41.9187.5±63.881.5±22.8
注:慢性重型肝炎两组早期无显著性差异,晚期与恢复期有高度显著性差异(P<0.01)
图1
慢性重型肝炎各期取其均值做动态曲线如下:结果明显看出早期中期无显著性差异,晚期与恢复期有高度显著性差异(P<0.01)。
2.4 肝硬化不同肝功能患者的血清sCR1浓度,笔者按照肝功能Child-Pugh分级,分为A、B、C三级,测定A级sCR1水平为(69.1±10.2)ng/ml;B级为(94.5±19.4)ng/ml;C级为(131.8±28.1)ng/ml。正常对照组为(34.3±9.1)ng/ml。结果随者级别的增高其浓度均有显著增高。C级的浓度显著高于A级。A、B、C三组之间比较差异高度显著,并且正常对照组血清sCR1最高浓度全部低于肝硬化人群。
2.5 慢性重型肝炎及肝硬化患者血清sCR1浓度≥100 ng/ml90例,<100 ng/ml59例,血清sCR1浓度持续>100 ng/ml的患者,其肝功能损伤较重,预后较差。
3 讨论
慢性重型肝炎系在急性肝脏损害的基础上以慢性免疫损伤为主的疾病,不但肝脏功能损伤严重,而且循环产生大量的免疫复合物,机体对循环免疫反应产物的清除功能状况,与疾病的发展和预后关系重要,肝病患者循环sCR1的量与循环免疫反应产物含量成正比关系,慢性重型肝炎,其病死率很高,早期发现和及时治疗是提高重型肝炎患者存活率的关键。因此研究慢性重型肝炎血清sCR1动态变化与肝脏功能损伤的程度,不但对深入研究慢性重型肝炎疾病发生发展的机制有重要意义,而且对探求新的治疗方案具有重要指导作用。慢性重型肝炎血清sCR1动态变化与肝脏功能损伤程度的关系研究结果表明,①慢性重型肝炎死亡组,存活组的早期、中期及肝硬化患者血清sCR1浓度均显著高于正常人群,且慢性重型肝炎死亡组,存活组的早期、中期患者血清sCR1浓度升高的幅度明显大于肝硬化患者,并随CHE的降低,PT的延长及PTA的降低而逐渐升高;②慢性重型肝炎两组的早期中期无明显差异性,但两组的晚期和恢复期有明显差异性;③肝硬化患者按Child分级不同,其sCR1浓度随肝功能损伤加重而上升;④血清sCR1浓度持续>100 ng/ml的患者,其肝功能损伤较重,预后较差。因此,慢性重型肝炎患者血清sCR1浓度的变化与肝功能损伤程度密切相关,该指标可作为慢性重型肝炎患者病情严重程度、判断病情发展及预后的重要参考指标。该研究创新处有:通过对慢性重型肝炎患者血清sCR1的动态变化的研究,探讨慢性重型肝炎血清sCR1浓度变化与该病发生、发展及预后的关系,探索预警慢性重型肝炎发生和发展的有效检测指标,这对慢性重型肝炎的診断和病程转归中的变化有着极其重要的意义。对慢性重型肝炎的早期、快速、准确诊断,提供了理论依据。
参考文献
[1] 金伯泉,主编.细胞和分子免疫学.世界图书出版公司出版,1998:41-43.
[2] 中华医学会传染病与寄生虫病分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华肝脏病杂志,2000,8:324-329.
【关键词】 慢性重型肝炎;sCR1;动态变化
The relation of chronic heavy type hepatitis serum sCR1 development change and hepar function loss degree
LIU Ai-xiang,MENG Fan-ke,ZHANG Yu-li,et al.
Zao Zhuang Shi Zhong District people hospita,277100 China
【Abstract】 Objective To resarch chronic heavy type hepatitis patient serum sCR1 thickness change studies , discusses chronic heavy type hepatitis sCR1 thickness change with the effective detecting index owing a disease occurrence , development and the prognosis relation.Methods Chose 78 cases chronic severe hepatitis,76 cases chronic hepatitis,61 cases cirrhosis in our hospital and 28 healthy people who were evaluate serum sCR1 by ELISA.Results Arithmetic weighted mean of serum sCR1 were(34.3±9.1)ng/ml in control group,chronic hepatitis group were(72.5±15.3)ng/ml,cirrhosis group were (91.8±28.1)ng/ml, chronic severe hepatitis group were (163.2±56.5)ng/ml.Conclusion Chronic heavy type hepatitis serum sCR1 development change isclosely related hepar function loss degree.
【Key words】 Chronic heavy type hepatitis sCR1 development change
DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.06.02
作者单位:277100山东省枣庄市立医院检验科
CR1是补体受体的一种,补体受体是细胞表面的重要膜结构。1993年Pascual等[1]报道了一种分子量为200KDa的可溶性CR1(sCR1),存在于正常血浆中,正常值为13~81 ng/ml。血清中sCR1由细胞分泌产生,血液中sCR1的水平与某些疾病具有一定的关联,研究发现sCR1水平升高与机体重要脏器的功能损伤相平行。
慢性重型肝炎,其病死率很高,早期发现和及时治疗是提高重型肝炎患者存活率的关键。因此笔者建立了血清sCR1酶联免疫夹心测定方法,研究慢性重型肝炎血清sCR1动态变化与肝脏功能损伤的程度,笔者对78例慢性重型肝炎患者,76例慢性肝炎患者,以及 61例肝硬化患者进行研究,现报告如下。
1 资料与方法
1.1 标本 本组215例为枣庄市立医院住院患者,均为乙肝病毒感染,男142例,女73例;年龄26~68岁。其中78例慢性重型肝炎、慢性肝炎76例及61例肝硬化患者,慢性肝炎又分为肝功能正常35例和肝功能活动期41例两组。均符合2000年《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准[2],正常对照组28例,均为枣庄血站健康献血员。静脉空腹采血后分离血清,所有血清皆冻存在-20℃冰箱,实验前于37℃解冻。
1.2 方法
1.2.1 免疫试剂 鼠抗人CR1 单抗(IgG1,E11克隆)、碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG、抗体稀释液、标准品、BSA、底物及底物液等由中国免疫学会红细胞免疫专业学组提供。
1.2.2 标本 待测血清皆冻存-20℃,实验前37℃解冻。
1.2.3 细胞制备 将“O”型正常人枸橼酸钠抗凝全血1 ml(在采血当日实验),2000 r/min,离心5 min,取中下层沉淀红细胞10 μl加入到含有等渗盐水的10 ml玻璃试管内混匀,洗涤两次,2000 r/min,离心5 min,保证每次洗涤无红细胞丢失。最后一次洗涤后弃净上清夜,加1%S/BSA90 μl和固定液10 μl,震荡混匀,室温固定30 min。再用5 ml1%S/BSA洗涤一次,弃净上清夜。加1%S/BSA1 ml制成红细胞悬液,4℃保存备用。
1.2.4 测定方法 将标准品(7孔)、空白对照(1孔,用抗体稀释液代替)、待测血清各100 μl加入空白V型板中,加入配制好的定量鼠抗人CR1单克隆抗体10 μl,37℃孵育60 min。每孔加入20 μl定量配制的“O” 红细胞悬液,振板器震荡混匀,37℃孵育30 min。用1%S/BSA洗涤两次,1500 r/min,板式水平离心2 min。每孔加入碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG10 μl,37℃孵育30 min。1%S/BSA洗涤两次。每孔加入120 μl配制好的底物液。37℃孵育30 min。水平离心,吸取上清液显色液100 μl移于另-U型比色板,在酶联免疫检测仪读取数值,同时用标准曲线计算其浓度。
1.2.5 统计学方法 计量资料以(x±s)表示,组间比较采用t检验。所有数据均由Excle處理。两两比较组内各数据间差异的显著性,以P<0.05表示有显著差异。慢性重型肝炎所分两组做动态曲线。
2 结果
2.1 对照组和不同肝病患者血清sCR1、CHE、PT、PTA变化见表1。
表1
对照组和不同肝病患者血清sCR1、CHE、PT、PTA变化(x±s)
分组例数sCR1(ng/ml)CHE(U/L)PT(S)PTA(%)
正常对照2834.3±9.16987.2±2989.312.9±3.1*89.9±15.3
慢性肝炎7672.5±15.34354.5±1891.218.5±3.161.5±17.5*
肝硬化6191.8±28.13678.2±1789.319.1±2.958.3±13.9
慢性重型肝炎78163.2±56.51992.4±1015.328.9±7.828.7±15.8
注:慢性重型肝炎与正常对照组,*P<0.01;与慢性肝炎、肝硬化,#P<0.01
2.2 慢性肝炎对照组所分的肝功能正常和肝功能活动期两组测sCR1含量X,发现两组存在显著性差异。肝功能活动组sCR1水平(102.8±19.8)ng/ml,肝功能正常组sCR1水平(49.2±11.5)ng/ml,肝功能活动组水平明显高与肝功能正常组。
2.3 慢性重型肝炎不同时期血清sCR1浓度的动态变化 作者把78例慢性重型肝炎分为死亡组和存活组。死亡组51例,分为早期、中期、晚期,存活组27例,分为早期、中期、恢复期。对不同时期做血清sCR1浓度测定。发现慢性重型肝炎两组早期中期无显著性差异,晚期与恢复期有高度显著性差异(P<0.01)见表2。
表2
慢性重型肝炎两组不同时期sCR1含量(x±s)
分组例数早期(ng/ml)中期(ng/ml)晚期(ng/ml)恢复期(ng/ml)
死亡组51132.9±43.5218.4±62.7248.7±71.5
存活组27141.2±41.9187.5±63.881.5±22.8
注:慢性重型肝炎两组早期无显著性差异,晚期与恢复期有高度显著性差异(P<0.01)
图1
慢性重型肝炎各期取其均值做动态曲线如下:结果明显看出早期中期无显著性差异,晚期与恢复期有高度显著性差异(P<0.01)。
2.4 肝硬化不同肝功能患者的血清sCR1浓度,笔者按照肝功能Child-Pugh分级,分为A、B、C三级,测定A级sCR1水平为(69.1±10.2)ng/ml;B级为(94.5±19.4)ng/ml;C级为(131.8±28.1)ng/ml。正常对照组为(34.3±9.1)ng/ml。结果随者级别的增高其浓度均有显著增高。C级的浓度显著高于A级。A、B、C三组之间比较差异高度显著,并且正常对照组血清sCR1最高浓度全部低于肝硬化人群。
2.5 慢性重型肝炎及肝硬化患者血清sCR1浓度≥100 ng/ml90例,<100 ng/ml59例,血清sCR1浓度持续>100 ng/ml的患者,其肝功能损伤较重,预后较差。
3 讨论
慢性重型肝炎系在急性肝脏损害的基础上以慢性免疫损伤为主的疾病,不但肝脏功能损伤严重,而且循环产生大量的免疫复合物,机体对循环免疫反应产物的清除功能状况,与疾病的发展和预后关系重要,肝病患者循环sCR1的量与循环免疫反应产物含量成正比关系,慢性重型肝炎,其病死率很高,早期发现和及时治疗是提高重型肝炎患者存活率的关键。因此研究慢性重型肝炎血清sCR1动态变化与肝脏功能损伤的程度,不但对深入研究慢性重型肝炎疾病发生发展的机制有重要意义,而且对探求新的治疗方案具有重要指导作用。慢性重型肝炎血清sCR1动态变化与肝脏功能损伤程度的关系研究结果表明,①慢性重型肝炎死亡组,存活组的早期、中期及肝硬化患者血清sCR1浓度均显著高于正常人群,且慢性重型肝炎死亡组,存活组的早期、中期患者血清sCR1浓度升高的幅度明显大于肝硬化患者,并随CHE的降低,PT的延长及PTA的降低而逐渐升高;②慢性重型肝炎两组的早期中期无明显差异性,但两组的晚期和恢复期有明显差异性;③肝硬化患者按Child分级不同,其sCR1浓度随肝功能损伤加重而上升;④血清sCR1浓度持续>100 ng/ml的患者,其肝功能损伤较重,预后较差。因此,慢性重型肝炎患者血清sCR1浓度的变化与肝功能损伤程度密切相关,该指标可作为慢性重型肝炎患者病情严重程度、判断病情发展及预后的重要参考指标。该研究创新处有:通过对慢性重型肝炎患者血清sCR1的动态变化的研究,探讨慢性重型肝炎血清sCR1浓度变化与该病发生、发展及预后的关系,探索预警慢性重型肝炎发生和发展的有效检测指标,这对慢性重型肝炎的診断和病程转归中的变化有着极其重要的意义。对慢性重型肝炎的早期、快速、准确诊断,提供了理论依据。
参考文献
[1] 金伯泉,主编.细胞和分子免疫学.世界图书出版公司出版,1998:41-43.
[2] 中华医学会传染病与寄生虫病分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华肝脏病杂志,2000,8:324-329.