重组人Bcl-2腺病毒载体的构建与鉴定

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目的 构建人bcl-2重组腺病毒载体.方法通过酶切分析获得正向插入目的基因的真核表达载体pcDNA/bcl-2,然后将bcl-2定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdCMV中,通过体内同源重组,重组质粒与质粒pJM17共转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/bcl-2,进行扩增、纯化.通过PCR检测病毒DNA,空斑实验检测病毒滴度.结果腺病毒穿梭质粒与pJM17体内同源重组后获得含目的基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×1010pfu/ml.结论基因重组腺病毒载体能成功获得高滴度含目的基因的腺病毒。

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