大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定

来源 :细胞与分子免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guozhenhui11
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Westernblot检测。采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白。目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%~30%。表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性。结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖。 Objective: To obtain a large number of recombinant rat β cytokines and test their activity. Methods: 534bp β-cytidylic gene fragment was amplified by PCR from rat kidney and cloned into prokaryotic expression vector pET28a (+) in frame. The recombinant plasmid pET28a-rBTC was transformed into Escherichia coli BL-21 (DE3) strain to express the β-cytidycine protein under the induction of IPTG. The expressed product was detected by SDS-PAGE and Western blot. The target protein was purified by nickel column affinity chromatography. Results: After induced by IPTG, the target protein with molecular weight of Mr 20000 could be expressed in Escherichia coli. The target protein is mainly expressed in the form of inclusion body; the expression level accounts for about 20% -30% of the total bacterial protein. The expressed protein has good reactivity with anti-His-tag antibody. CONCLUSION: The rat β-cytokine gene is highly expressed in the PET expression system and the protein renaturation can effectively promote the proliferation of NIH3T3 cells in vitro.
其他文献
标题的这句话是尼采说的。的确,世界上恐怕惟有音乐是一种可以不分国界、不分种族的语言,无论你身在何处,无论你贫穷还是富足,只要你愿意,都可以享受音乐带给你的美妙旅程。
为探讨卡托普利与依那普利两药的急性降压作用与安全性,将高血压病患者42例随机分为两组,其中22例以卡托普利50mg舌下含服为治疗组,20例采用依那普利10mg舌下含服为对照组。结果显示,两种药物均
在物理学习过程中对学生学习主动性的培养,是适应物理新课程改革趋势的要求,也是物理教学模式向现代化教学转变的必然要求。在新时期的教育环境中,要求将学生培养成自主、独
Cu—Al—Mn低温形状记忆合金管子连接件和机械紧固件是目前形状记忆合金最成功的应用,并且几乎都要使用价格昂贵的Ni—Ti合金。为了开发廉价的实用形状记忆合金,奥地利物理冶金和材料试验
左旋氧氟沙星对革兰氏阳性菌抗菌活性研究重庆医科大学附属第一医院(630042)肖永红,王其南,李崇智,陈海,刘鸿渝左旋氧氟沙星为新近开发的一种氟喹诺酮类药物,其对革兰氏阴性及阳性细菌均有
患者男,53岁。于10个月前发现右颈部肿块,当时如山核桃大小,当地医院予以抗炎治疗,肿块无明显变化。2周前肿块明显增大伴疼痛,故来我院就诊。查体:右颏下至右锁骨上窝可及直
2010年11月9日,已是初冬时节。今年最后一期《贵阳文史》已经编排就绪,静静地躺在我的案头,无言地等待“卷首语”的杀青……在编辑们委婉的催促声中,我却有一种不知从何处入
急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的主要并发症之一,重度aGVHD治疗效果差,一旦发生,病死率极高,是移植成功的主要障碍之一。目前,防治aGVHD主要是应用系统性免疫抑制剂,由此可导致移植后感染率及恶性肿瘤复发率增加,因此,进一步探讨aGVHD的发病机制及防治方法是移植免疫亟待解决的问题。已有的研究表明,aGVHD发生与细胞因子密切相关,研究细胞因子不仅可
为了进一步了解国内公关业受金融危机的影响程度,本刊记者从服务收入、业务结构、人员状况、公关预算、市场预期等方面,调查采访了近40家大中型公关公司和著名企业的公共关系
工作场所空气中锰含量的测定具有非常重要的意义,它可以帮助相关工作企业明确了解工作场所空气中的锰含量,督促企业采取一定的措施给工作人员提供保护,预防相关工作人员出现