【摘 要】
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目的建立干冰研磨在总RNA提取中的应用,评价使用干冰研磨提取总RNA的质量。方法使用TRIzol法及吸附柱(Column)法结合三种研磨方式(液氮研磨、干冰研磨、溶剂研磨)从大鼠海马
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81100852);江苏省高校自然科学研究面上项目(16621201)
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目的建立干冰研磨在总RNA提取中的应用,评价使用干冰研磨提取总RNA的质量。方法使用TRIzol法及吸附柱(Column)法结合三种研磨方式(液氮研磨、干冰研磨、溶剂研磨)从大鼠海马、肝脏、晶体中提取总RNA,检测A260/A280、A260/A230分析总RNA的纯度,检测核糖体大亚基与小亚基比值(LS/SS)分析总RNA的完整性,通过对比反转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物与循环次数的关系衡量干冰研磨提取总RNA用于下游实验的效果。结果分析显示使用干冰研磨抽提的总RNA其A260/A280、A260/A230值均在1.9~2.1之间;LS/SS约为2.2;目的基因随循环次数增加的数量高于溶剂研磨。结论以上数据说明干冰研磨可有效的使组织细胞破碎,阻止RNA酶对RNA的降解,总RNA的纯度及完整性接近液氮研磨,远高于溶剂研磨方式,且干冰研磨比液氮研磨安全,适合于大规模的实验教学操作。
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