【摘 要】
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目的比较多种定量检测狂犬病毒(RV)及其核酸的方法。方法采用免疫细胞化学(ICCA)、RT-PCR、间接和直接免疫荧光(FA)以及细胞ELISA(CELISA)等多种方法对感染细胞单层的RV进行
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目的比较多种定量检测狂犬病毒(RV)及其核酸的方法。方法采用免疫细胞化学(ICCA)、RT-PCR、间接和直接免疫荧光(FA)以及细胞ELISA(CELISA)等多种方法对感染细胞单层的RV进行定量检测,比较和评价用不同方法检测RV的灵敏度和稳定性。结果采用ICCA法可在3h内对培养24h的RV进行准确和定量检测,可检测到RV的单个病灶(FFU),其灵敏度和稳定性与FA相当而优于CELISA;用RT-PCR的方法检测RV mRNA具有很高的灵敏度,通过测定RT-PCR产物电泳条带的灰度值,并经GAPDH基因校正,在感染细胞RV的量与其RT-PCR产物间建立了量效关系曲线及曲线方程,其决定系数(R2)达0.96。结论建立了多种方法对RV进行定量检测,其中用ICCA检测可在不使用荧光显微镜情况下对RV进行定量检测,经济实用,适于基层推广使用;用RT-PCR的方法亦可高灵敏度地检测RV的核酸,并进行定量分析。
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