【摘 要】
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目的:构建携带星形胶质细胞升高基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)的慢病毒载体并进行慢病毒包装,感染结直肠癌SW1116细胞建立稳定株,检测AEG-1改变后对血管生成相关
【机 构】
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南方医科大学,广东省人民医院广东省医学科学院
【基金项目】
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广东省自然科学基金资助项目,No.10151008008000005;广东省科技计划基金资助项目,Nos.2011B031800001,2011B031800004~~
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目的:构建携带星形胶质细胞升高基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)的慢病毒载体并进行慢病毒包装,感染结直肠癌SW1116细胞建立稳定株,检测AEG-1改变后对血管生成相关因子缺氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)和miR-34a表达的影响.方法:采用Western blot方法筛选合适的结直肠癌细胞株;构建携带AEG-1的慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆及测序鉴定后,用psPAX、pMD2.G慢病毒包装系统共转染包装细胞293FT,包装产生慢病毒,用以感染筛选出来的结肠癌细胞,细胞提取mRNA和蛋白进行qRT-PCR和Western blot分析验证细胞模型建立是否成功.分别采用qRT-PCR和Western blot检测miR-34a和HIF-1α在AEG-1转染前后的表达变化情况.结果:蛋白质印迹结果显示SW1116在7个结直肠癌中的表达量最低(P<0.05);成功构建AEG-1的慢病毒载体,对结肠癌SW1116细胞株AEG-1表达的上调作用显著(0.53±0.44vs 2.02±0.22,P<0.05;0.71±0.14 vs 2.02±0.22,P<0.05),上调AEG-1的表达会抑制miR-34a(P<0.01)和促进HIF-1α(P<0.01)的表达.结论:成功构建AEG-1慢病毒载体,AEG-1在结直肠癌中可以抑制血管生成相关因子miR-34a和促进HIF-1α的表达,我们推测AEG-1可能通过抑制miR-34a促进HIF-1α的表达,从而发挥促进肿瘤血管新生的作用.
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