【摘 要】
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目的 建立一种简便、敏感、精确的微反应板酶联杂交技术 ,以鉴定HBV基因的竞争PCR扩增产物。方法 设计了两种捕获探针 ,能分别与竞争PCR扩增产物中的野生片段和突变片段杂
【机 构】
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第二军医大学附属长征医院感染科; 第二军医大学附属长征医院; 第二军医大学微生物学教研室;
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目的 建立一种简便、敏感、精确的微反应板酶联杂交技术 ,以鉴定HBV基因的竞争PCR扩增产物。方法 设计了两种捕获探针 ,能分别与竞争PCR扩增产物中的野生片段和突变片段杂交。捕获探针通过 3′ 端修饰的氨基与微量DNA结合板孔表面的NOS基团化学结合而被“竖直”地包被在反应板上 ;将热变性后的产物加入两种捕获探针反应孔内 ,产物中带有生物素的野生或突变片段的一条单链与相应的捕获探针杂交 ;最后用链亲和素 碱性磷酸酶及底物检测杂交信号。结果 该方法检测PCR产物DNA的灵敏度为 80ng/ml,大于琼脂糖凝胶电泳染色鉴定法。获得野生片段和突变片段杂交信号值后 ,可根据公式计算扩增前野生模板的初始量。结论 本方法操作简单、灵敏度高、结果数据化、特异性强 ,适用于竞争PCR产物分析。
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