【摘 要】
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目的:克隆表达2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶(NagB)编码基因,并测定其酶反应体系活性。方法:根据2型猪链球菌05ZYH33基因组序列,全合成nagB基因(ssu05_0195),并将其克隆
【机 构】
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徐州医科大学,解放军东部战区疾病预防控制中心
【基金项目】
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国家传染病重大专项(2018ZX10713-003-001-010);国家自然科学基金(81471920);传染病数据收集及平台应用推广(2017ZX10303401-007);军队后勤项目(16J020)
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目的:克隆表达2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶(NagB)编码基因,并测定其酶反应体系活性。方法:根据2型猪链球菌05ZYH33基因组序列,全合成nagB基因(ssu05_0195),并将其克隆至pET32a载体,在大肠杆菌中表达;利用Ni亲和层析柱纯化表达产物,获得纯化的NagB蛋白,Western印迹鉴定后测定其酶反应体系活性。结果:在大肠杆菌中高效表达了nagB基因,重组NagB相对分子质量约为56×10^3;在25℃、pH9.5、底物浓度为15mmol/L、反应40min时,NagB
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