【摘 要】
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目的评价接枝Nogo-66受体(NgR)抗体和多聚左旋赖氨酸(PLL)的透明质酸(HA)水凝胶支架的作用,及转染β神经生长因子(β-NGF)基因的内皮祖细胞(EPCs)能否在支架内稳定表达外源基
【基金项目】
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山东省科技发展计划(2014GSF118045)
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目的评价接枝Nogo-66受体(NgR)抗体和多聚左旋赖氨酸(PLL)的透明质酸(HA)水凝胶支架的作用,及转染β神经生长因子(β-NGF)基因的内皮祖细胞(EPCs)能否在支架内稳定表达外源基因。方法采用冰冻干燥法制备多孔HA水凝胶材料,将NgR抗体和PLL接枝到HA支架上。体外培养EPCs,并通过携带β-NGF腺病毒转染EPCs,将EPCs与支架共培养,通过扫描电镜观察支架结构,将细胞按处理方式及培养方式分为β-NGF+组、Scaffold-β-NGF+组、β-NGF-组、Scaffold-β-NGF-组、对照组和Scaffold-对照组。采用细胞活力(CCK-8)法及HE法检测EPCs在支架上的生长情况,采用乳酸脱氢酶(LDH)-细胞毒性法检测支架的细胞毒性,采用ELISA法、Rt-PCR法和Western blotting法检测β-NGF的表达。结果制备的支架具备三维多孔结构,孔径(200±15)μm,大小较均一,EPCs在支架上的生长明显优于培养板中的生长状况(F=468 518.044,P<0.001),且随时间推移,细胞数目差异有统计学意义(F=2 678 658.138,P<0.001),支架的细胞毒性相比培养板无明显异常(F=0.680,P=0.429)。EPCs在支架上可以稳定表达β-NGF,且Scaffold-β-NGF+组mRNA及蛋白质的表达量均优于β-NGF+组(mRNA:F=651.554,P<0.001;蛋白:F=14 671.733,P<0.001)。结论 EPCs与NgR抗体-PLL复合A水凝胶支架具有良好的生物相容性。该HA水凝胶支架有望作为修复脊髓损伤的组织工程载体。
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