【摘 要】
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为了研究多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)片段的免疫原性,本试验对8个PMT片段分别进行了原核表达后比较分析。根据toxA基因序列,分别设计引物扩增出8个分段基因,再将其克隆到原核表
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为了研究多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)片段的免疫原性,本试验对8个PMT片段分别进行了原核表达后比较分析。根据toxA基因序列,分别设计引物扩增出8个分段基因,再将其克隆到原核表达载体pET32a系统中。SDSPAGE结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中均成功表达;Western-blotting结果表明,仅重组PMT1-506aa、PMT1-391aa、PMT505-1285aa和PMT973-1285aa片段的表达产物具有反应原性。将该4个重组PMT片段分别制成疫苗,皮下注射免疫小鼠,间隔14d进行二免。二免后14d,用天然PMT进行皮下注射攻毒。结果以2×LD100进行攻毒时,免疫保护效果PMT1-506aa(10/10)、PMT505-1285aa(10/10)、PMT973-1285aa(8/10)显著优于PMT1-391aa(1/10);以5×LD100进行攻毒时,免疫保护效果PMT1-506aa(10/10)、PMT505-1285aa(10/10)显著优于PMT973-1285aa(3/10)、PMT1-391aa(0/10);以10×LD100进行攻毒时,免疫保护效果PMT505-1285aa(10/10)显著优于PMT1-506aa(3/10)。本研究表明,PMT505-1285aa的免疫保护率最高,最适合作为预防PAR的候选疫苗材料。
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