论文部分内容阅读
摘要[目的] 探讨仔猪血清运铁蛋白多态性与生产性能的相关性。[方法]采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳法对60头仔猪血清运铁蛋白多态性进行了研究，并对血清运铁蛋白多态性与生产性能进行了相关性分析。[结果]被检仔猪血清运铁蛋白有2种基因型（TfAB和TfBB），以TfBB为优势基因型，基因型频率分别为0.333 3和0.666 7；TfA和TfB等位基因频率分别为0.166 7和0.833 3，以TfB为优势基因。仔猪血清运铁蛋白多态性与生产性能间无显著相关（P>0.05）。[结论]仔猪血清运铁蛋白存在多态性，且血清蛋白多态性与生产性能间无显著相关。
关键词仔猪；血清运铁蛋白；多态性；体重；体高；体长
中图分类号S828文献标识码A文章编号0517-6611（2014）01-00128-02
作者简介卢福山（1969-），男，青海湟源人，教授，从事兽医临床教学和动物生化遗传标记研究，Email：Lufushan3341@126.com。
收稿日期20131209自1955年Smithies创建淀粉凝胶电泳法以来，国内外学者采用电泳方法对不同畜禽品种的血液蛋白、酶、乳蛋白、卵蛋白、精清蛋白等的多态性及其遗传机制进行了大量深入研究，这些研究大多用于确定品种间的差异程度，估计品种间亲缘关系，考证品种的起源、进化和驯化过程[1-4]，或根据血浆蛋白位点的基因纯合度分析群体的近交程度[5]，或利用血浆蛋白多态性作为遗传标记来探讨早期选种的可能性[6-9]。目前，有关血液蛋白型与生产性能间的相关报道较多，但结果并不一致[10]。鉴于此，笔者对青海大学农牧学院实习牧场养殖的45日龄仔猪的血清运铁蛋白多态性进行研究，并测量计算1周前后体重、体长、体高的平均日增量，以探讨血清运铁蛋白多态性与生产性能的相关性。
1材料与方法
1.1实验动物青海大学农牧学院实习牧场养殖的60头45日龄仔猪，试验仔猪营养良好，临床健康。
1.2主要试剂胶原液；pH 8.9 Tris-HCl缓冲液；pH 6.9 Tris-HCl缓冲液；Tris-甘氨酸电泳缓冲液（pH 8.3）；10%过硫酸铵（AP）；四甲基乙二胺（TEMED）考马斯亮蓝染色试剂；0.1%溴酚蓝；40%蔗糖液等。
1.3主要仪器TDZ4AWS离心机（长沙湘仪离心机有限公司制造）；DYYIII型电泳仪（北京六一仪器厂制造）。
1.4血样采集清晨饲喂前，从仔猪前腔静脉采集非抗凝血5 ml，立即送至实验室分离血清（3 000 r/min，离心10 min），备用。
1.5生产性能测定对试验猪进行2次体重、体高、体长测定，间隔时间为1周，并记录数据。其中，体高为肩胛最高点到地面的垂直距离，体长为肩端至坐骨端的距离。
1.6样品制备取血清0.1 ml，加入40%蔗糖液20 μl，再加入0.1%溴酚蓝20 μl，混匀备用。
1.7垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳
1.7.1分离胶和浓缩胶组成成分。分离胶和浓缩胶的组成成分见表1。
1.7.2 凝胶制备。取少量分离胶倒入小烧杯中，加入AP和TEMED混匀后立刻灌胶，待胶凝固封底后。在剩余的分离胶中加入AP和TEMED，立即灌胶并覆盖水层，待凝胶与水层之间出现明显界面时，表明分离胶已经聚合凝固，用注射器抽掉水层。确定分离胶彻底凝固后，配制浓缩胶，混匀后灌胶，立刻插入样品槽模板，待胶凝固后取出样品槽模板（注意垂直向上取出），并将垂直平板底槽去掉，平板移至电泳槽中，并用夹子固定两侧，将Tris-甘氨酸电泳缓冲液置于垂直平板电泳上、下槽中，并点样2 μl。
1.7.3电泳。上槽与负极连接，下槽与正极相连，先调节电压为120 V，开始电泳。当指示染料进入分离胶后，将电压调至200 V，电泳5 h后停止电泳，断开电源。
1.7.4染色。电泳结束后，取出垂直电泳平板，将胶片取出，浸入考马斯亮蓝染色液中染色0.5～1.0 h，再用脱色液漂洗直至背景无色为止。
1.7.5Tf分型。按照铃木正三等[11]记载的标准和图谱判定Tf型，对少数区带不清晰者进行重复试验。
1.8数据处理与分析
1.8.1基因型频率和基因频率。按照仔猪血清运铁蛋白基因座受一对共显性等位基因控制的假设，根据实测数用单一计数法计算基因型频率和基因频率。
1.8.2相关性分析。对仔猪不同运铁蛋白型的生产性能采用t检验分析差异显著性。
2结果与分析
2.1仔猪血清运铁蛋白基因型分布和基因频率从图1可以看出，被检仔猪血清运铁蛋白（Tf）有AB型和BB型2种基因型，且呈多态性。2种基因型频率分别为0.333 3和0.666 7，其中BB型为优势基因型；TfA和TfB等位基因的频率分别为0.166 7和0.833 3，而TfB为优势基因。
3讨论
3.1仔猪血清运铁蛋白多态性血清运铁蛋白作为一种铁结合糖蛋白[12]，其合成受到基因的控制，也是基因的一种表达产物。因此，尽管它具有相对稳定性，但仍以一定的频率发生各种形式的变异而形成多态性。自1957年Smithies采用淀粉凝胶电泳法首次鉴定出Tf的多态性以后，迄今已在此基因座位发现了10个共显性等位基因，其中TfB为优势基因，其次是TfA和TfC，其余基因则非常罕见[13]。该研究表明被检的仔猪群体中因Tf存在AB和BB 2种基因型而呈多态性，其基因型频率分别为0.333 3和0.666 7，其中BB基因型为优势基因型；TfA和TfB基因频率分别为0.166 7和0.833 3，以TfB为优势基因。此结果与黄海根等[14]在华东南地区部分地方猪群、陶钧等[15]在湖南地方猪种群的研究结果相似。 3.2仔猪血清运铁蛋白多态性与其生产性能相关性血液蛋白（酶）多态性作为一种重要的生化遗传标记，已被广泛应用于探讨畜禽品种的起源、进化及品种间的亲缘关系，并利用这些标记进行遗传学检测，进行早期选育的辅助标记。利用血清运铁蛋白遗传标记来研究猪的生产性能的报道较多[6，8，10]，但存在着较大的分歧。该试验中被检仔猪血清运铁蛋白多态性与生产性能（体重、体长和体高）日增量间无显著差异（P>0.05），说明仔猪血清运铁蛋白多态性与生产性能间的相关性不显著。这与吴金亮等[16]在滇玉新品系猪、王彦芳等[17]在甘肃黑猪的研究结果相一致。
参考文献
[1] 邹峄，陈世荃，黄路生.家畜血型及其应用[M].济南：山东科技出版社，1990：57-59.
[2] 黄路生，邹峄.中国部分猪种同种异名的研究[J].畜牧兽医学报，1989，20（2）：117-124.
[3] 陶钧，邹峄.湖南地方猪种群亲缘关系的生化遗传学研究[J].畜牧兽医学报，1992，23（1）：13-21.
[4] TANAKA K.Genetic relationship among several pig populations in east Asia analysed by blood group locus and serum protein polymorphisms[J].Animal Blood and Biochemical Genetics，1983，14（2）：191-200.
[5] 萧朝武，施启顺，柳小春，等.几个外来猪群的血浆蛋白多态型分析[J].湖南农学院学报，1992，8（2）：299-307.
[6] 邹峄，朱正义，欧阳汝钧，等.乐平花猪血清转铁蛋白类型与瘦肉率和背膘厚度的关系[J].中国畜牧杂志，1987（6）：38.
[7] 吴译夫，夏祖灼，李齐贤.猪血清蛋白多态性研究[J].东北养猪，1987（4）：8-9.
[8] 张彬.猪血浆转铁蛋白与部分经济性状关系的研究（Ⅱ）[J].湖南农学院学报，1990，16（3）：288-292.
[9] KRISTJANSSON F K.Transferrin types and reproductive performance in the pigs[J].J Reprod Fertil，1964，8（3）：311-317.
[10] 江铁山，刘小春.猪血浆蛋白多态性及其与日增重关系的研究[J].湖南农业大学学报，1997，23（1）：63-68.
[11] 铃木正三.比较血型学[M].程光潮，韩建林，杨华林，等，译.北京：中国利学技术出版社，1991：155-157.
关键词仔猪；血清运铁蛋白；多态性；体重；体高；体长
中图分类号S828文献标识码A文章编号0517-6611（2014）01-00128-02
作者简介卢福山（1969-），男，青海湟源人，教授，从事兽医临床教学和动物生化遗传标记研究，Email：Lufushan3341@126.com。
收稿日期20131209自1955年Smithies创建淀粉凝胶电泳法以来，国内外学者采用电泳方法对不同畜禽品种的血液蛋白、酶、乳蛋白、卵蛋白、精清蛋白等的多态性及其遗传机制进行了大量深入研究，这些研究大多用于确定品种间的差异程度，估计品种间亲缘关系，考证品种的起源、进化和驯化过程[1-4]，或根据血浆蛋白位点的基因纯合度分析群体的近交程度[5]，或利用血浆蛋白多态性作为遗传标记来探讨早期选种的可能性[6-9]。目前，有关血液蛋白型与生产性能间的相关报道较多，但结果并不一致[10]。鉴于此，笔者对青海大学农牧学院实习牧场养殖的45日龄仔猪的血清运铁蛋白多态性进行研究，并测量计算1周前后体重、体长、体高的平均日增量，以探讨血清运铁蛋白多态性与生产性能的相关性。
1材料与方法
1.1实验动物青海大学农牧学院实习牧场养殖的60头45日龄仔猪，试验仔猪营养良好，临床健康。
1.2主要试剂胶原液；pH 8.9 Tris-HCl缓冲液；pH 6.9 Tris-HCl缓冲液；Tris-甘氨酸电泳缓冲液（pH 8.3）；10%过硫酸铵（AP）；四甲基乙二胺（TEMED）考马斯亮蓝染色试剂；0.1%溴酚蓝；40%蔗糖液等。
1.3主要仪器TDZ4AWS离心机（长沙湘仪离心机有限公司制造）；DYYIII型电泳仪（北京六一仪器厂制造）。
1.4血样采集清晨饲喂前，从仔猪前腔静脉采集非抗凝血5 ml，立即送至实验室分离血清（3 000 r/min，离心10 min），备用。
1.5生产性能测定对试验猪进行2次体重、体高、体长测定，间隔时间为1周，并记录数据。其中，体高为肩胛最高点到地面的垂直距离，体长为肩端至坐骨端的距离。
1.6样品制备取血清0.1 ml，加入40%蔗糖液20 μl，再加入0.1%溴酚蓝20 μl，混匀备用。
1.7垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳
1.7.1分离胶和浓缩胶组成成分。分离胶和浓缩胶的组成成分见表1。
1.7.2 凝胶制备。取少量分离胶倒入小烧杯中，加入AP和TEMED混匀后立刻灌胶，待胶凝固封底后。在剩余的分离胶中加入AP和TEMED，立即灌胶并覆盖水层，待凝胶与水层之间出现明显界面时，表明分离胶已经聚合凝固，用注射器抽掉水层。确定分离胶彻底凝固后，配制浓缩胶，混匀后灌胶，立刻插入样品槽模板，待胶凝固后取出样品槽模板（注意垂直向上取出），并将垂直平板底槽去掉，平板移至电泳槽中，并用夹子固定两侧，将Tris-甘氨酸电泳缓冲液置于垂直平板电泳上、下槽中，并点样2 μl。
1.7.3电泳。上槽与负极连接，下槽与正极相连，先调节电压为120 V，开始电泳。当指示染料进入分离胶后，将电压调至200 V，电泳5 h后停止电泳，断开电源。
1.7.4染色。电泳结束后，取出垂直电泳平板，将胶片取出，浸入考马斯亮蓝染色液中染色0.5～1.0 h，再用脱色液漂洗直至背景无色为止。
1.7.5Tf分型。按照铃木正三等[11]记载的标准和图谱判定Tf型，对少数区带不清晰者进行重复试验。
1.8数据处理与分析
1.8.1基因型频率和基因频率。按照仔猪血清运铁蛋白基因座受一对共显性等位基因控制的假设，根据实测数用单一计数法计算基因型频率和基因频率。
1.8.2相关性分析。对仔猪不同运铁蛋白型的生产性能采用t检验分析差异显著性。
2结果与分析
2.1仔猪血清运铁蛋白基因型分布和基因频率从图1可以看出，被检仔猪血清运铁蛋白（Tf）有AB型和BB型2种基因型，且呈多态性。2种基因型频率分别为0.333 3和0.666 7，其中BB型为优势基因型；TfA和TfB等位基因的频率分别为0.166 7和0.833 3，而TfB为优势基因。
3讨论
3.1仔猪血清运铁蛋白多态性血清运铁蛋白作为一种铁结合糖蛋白[12]，其合成受到基因的控制，也是基因的一种表达产物。因此，尽管它具有相对稳定性，但仍以一定的频率发生各种形式的变异而形成多态性。自1957年Smithies采用淀粉凝胶电泳法首次鉴定出Tf的多态性以后，迄今已在此基因座位发现了10个共显性等位基因，其中TfB为优势基因，其次是TfA和TfC，其余基因则非常罕见[13]。该研究表明被检的仔猪群体中因Tf存在AB和BB 2种基因型而呈多态性，其基因型频率分别为0.333 3和0.666 7，其中BB基因型为优势基因型；TfA和TfB基因频率分别为0.166 7和0.833 3，以TfB为优势基因。此结果与黄海根等[14]在华东南地区部分地方猪群、陶钧等[15]在湖南地方猪种群的研究结果相似。 3.2仔猪血清运铁蛋白多态性与其生产性能相关性血液蛋白（酶）多态性作为一种重要的生化遗传标记，已被广泛应用于探讨畜禽品种的起源、进化及品种间的亲缘关系，并利用这些标记进行遗传学检测，进行早期选育的辅助标记。利用血清运铁蛋白遗传标记来研究猪的生产性能的报道较多[6，8，10]，但存在着较大的分歧。该试验中被检仔猪血清运铁蛋白多态性与生产性能（体重、体长和体高）日增量间无显著差异（P>0.05），说明仔猪血清运铁蛋白多态性与生产性能间的相关性不显著。这与吴金亮等[16]在滇玉新品系猪、王彦芳等[17]在甘肃黑猪的研究结果相一致。
参考文献
[1] 邹峄，陈世荃，黄路生.家畜血型及其应用[M].济南：山东科技出版社，1990：57-59.
[2] 黄路生，邹峄.中国部分猪种同种异名的研究[J].畜牧兽医学报，1989，20（2）：117-124.
[3] 陶钧，邹峄.湖南地方猪种群亲缘关系的生化遗传学研究[J].畜牧兽医学报，1992，23（1）：13-21.
[4] TANAKA K.Genetic relationship among several pig populations in east Asia analysed by blood group locus and serum protein polymorphisms[J].Animal Blood and Biochemical Genetics，1983，14（2）：191-200.
[5] 萧朝武，施启顺，柳小春，等.几个外来猪群的血浆蛋白多态型分析[J].湖南农学院学报，1992，8（2）：299-307.
[6] 邹峄，朱正义，欧阳汝钧，等.乐平花猪血清转铁蛋白类型与瘦肉率和背膘厚度的关系[J].中国畜牧杂志，1987（6）：38.
[7] 吴译夫，夏祖灼，李齐贤.猪血清蛋白多态性研究[J].东北养猪，1987（4）：8-9.
[8] 张彬.猪血浆转铁蛋白与部分经济性状关系的研究（Ⅱ）[J].湖南农学院学报，1990，16（3）：288-292.
[9] KRISTJANSSON F K.Transferrin types and reproductive performance in the pigs[J].J Reprod Fertil，1964，8（3）：311-317.
[10] 江铁山，刘小春.猪血浆蛋白多态性及其与日增重关系的研究[J].湖南农业大学学报，1997，23（1）：63-68.
[11] 铃木正三.比较血型学[M].程光潮，韩建林，杨华林，等，译.北京：中国利学技术出版社，1991：155-157.