【摘 要】
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目的 构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果.方法 设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6
【机 构】
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中南大学湘雅医院普外科,湖南长沙,410008;中南大学湘雅医学院基础医学院病理生理学系,湖南长沙,410008;中南大学湘雅二医院心胸外科,湖南长沙,410008;中南大学细胞与分子生物学实验教学中
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目的 构建有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,并验证其干扰效果.方法 设计合成3对针对人FoxA1基因的和1对无同源性的shRNA片段,将合成的shRNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人FoxA1基因的shRNA和空白对照载体.将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901),Realtime RT-PCR和Western-blotting检测干扰载体的干扰效率.结果 ①酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功.将空载体及各干扰载体分别转染人正常胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(SGC-7901)发现,和空白对照组相比,3组干扰载体能够从mRNA和蛋白表达水平明显抑制FoxA1的表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以3号质粒对Foxa1的干扰效率最强.结论 成功构建了三个有效的针对人FoxA1基因的shRNA干扰载体,三组质粒都能有效地抑制FoxA1在GES-1细胞和SGC-7901细胞中的表达.
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