【摘 要】
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目的 构建针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.方法 设计3条针对皮质肌动蛋白(cortactin)基因的短发卡RNA(shRNA)序列以及l条对照序列,退火后插入到PLKO.1慢病毒质粒载体中,质粒构建完成后和辅助质粒psPAX2,PCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,包装成慢病毒颗粒,感染胃癌SGC-7901细胞株,并使用嘌呤霉素筛选.最终筛选出3个细胞株,提取
【机 构】
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200092上海,同济大学医学院,同济大学医学院附属东方医院胃肠外科,同济大学医学院附属东方医院胃肠外科,同济大学医学院附属东方医院胃肠外科,同济大学医学院附属东方医院胃肠外科
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目的 构建针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株.方法 设计3条针对皮质肌动蛋白(cortactin)基因的短发卡RNA(shRNA)序列以及l条对照序列,退火后插入到PLKO.1慢病毒质粒载体中,质粒构建完成后和辅助质粒psPAX2,PCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,包装成慢病毒颗粒,感染胃癌SGC-7901细胞株,并使用嘌呤霉素筛选.最终筛选出3个细胞株,提取该3株细胞的RNA和蛋白质分别进行实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测cortactin基因的mRNA和蛋白的表达.结果 在3株不同的稳定细胞株中,PLKO.1+shRNA3细胞株cortactin基因的mRNA和蛋白质表达下降最为明显,约为对照组的10％.结论 成功构建出针对cortactin基因干扰的胃癌SGC-7901稳定细胞株。
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