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采用小鼠原代成纤维细胞作为饲养层,在含1×103单位白血病抑制因子(LIF)的DMEM高糖培养基中,建成了11个C57BL/6J小鼠的ES细胞系,成系率为9.6%。所建的11个ES细胞系中有5个核型正常率大于70%。这些细胞具早期胚胎细胞的特征,呈碱性磷酸酶阳性,具表达0014基因的特性5进行体内分化实验时能发生广泛的分化。通过嵌合体制作实验证明其中3个系具嵌合能力,并从中筛选出具高效种系嵌合能力的MESPU35细胞系,MESPU35细胞的克隆能达到种系传递,经过基因操作的细胞克隆,也保留了高效的嵌合能力。因此,MESPU35细胞可作为制作突变小鼠的有效载体。