目的建立用高效液相色谱质谱联用(HPLC-MS/MS)技术测定大鼠血浆、脑组织及肺组织中戊乙奎醚浓度的方法。方法大鼠血浆、脑组织及肺组织样品中戊乙奎醚及内标苯海拉明经石油醚∶乙醚(70∶30)提取后,采用HPLC-MS/MS技术进行测定。以Allure C18(50×2.1 mm,5μm)为色谱柱,以甲醇∶5 mmol/L醋酸胺∶三乙胺=90∶10∶0.05(甲酸调pH5.8)为流动相进行分离,检测离子为质荷比(m/z)316.2/128.3(戊乙奎醚),256.3/167.1(内标)。结果标准曲线线性范围为血浆0.391～200 ng/mL,脑组织及肺组织0.391～100 ng/mL。预处理回收率为血浆67.32%～70.80%,肺组织84.99%～89.27%,脑组织76.86%～81.98%;方法回收率为血浆97.66%～99.97%,肺组织96.55%～101.65%,脑组织95.18%～100.21%;日内精密度RSD分别为:血浆1.94%～2.93%,肺组织1.73%～3.70%,脑组织2.35%～2.79%;日间精密度RSD分别为:血浆3.00%～3.85%,肺组织2.86%～3.94%,脑组织2.77%～5.00%;血浆和组织样品保存于-30℃低温冰箱7、21 d,分别测定浓度以考察稳定性,RSD分别为:血浆1.52%～5.26%,肺组织1.88%～2.93%,脑组织2.22%～3.76%;反复冻融1次和2次测定样品浓度,血浆RSD为0.38%～3.55%,肺组织为2.79%～9.60%,脑组织为1.35%～2.29%。结论成功建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆及组织中戊乙奎醚浓度的方法,该法简便、准确、重现性好,可用于盐酸戊乙奎醚药动学和生物利用度研究。