【摘 要】
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谷氨酸棒杆菌是食品安全级菌株,可作为生产高价值产物的优良底盘细胞用于工业生产.它具有良好的分泌系统,是表达重组蛋白的潜在宿主,有极大的研究价值.为优化底盘细胞提高其蛋白表达能力,挖掘并验证谷氨酸棒杆菌中与外源蛋白高表达相关的基因.在谷氨酸棒杆菌重测序的基础上,应用生物信息学对单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphisms,SNP)基因进行挖掘,分析基因保守结构域.通过构建SNP基因过表达和敲除重组菌株,评估其生长情况以及增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fl
【机 构】
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江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏 无锡,214122;江南大学,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,江苏 无锡,214122;江南大学 生物工程学院,江苏 无锡,214122
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谷氨酸棒杆菌是食品安全级菌株,可作为生产高价值产物的优良底盘细胞用于工业生产.它具有良好的分泌系统,是表达重组蛋白的潜在宿主,有极大的研究价值.为优化底盘细胞提高其蛋白表达能力,挖掘并验证谷氨酸棒杆菌中与外源蛋白高表达相关的基因.在谷氨酸棒杆菌重测序的基础上,应用生物信息学对单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphisms,SNP)基因进行挖掘,分析基因保守结构域.通过构建SNP基因过表达和敲除重组菌株,评估其生长情况以及增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)和人重组特立帕肽(recombinant human teriparatide,rtPTH)的外源蛋白表达能力.分析并整理了高产量外源蛋白菌株的重测序数据,共有33个SNP突变位点,主要涉及5个基因.其中SNP重组菌株over-2370和ko-973-974的荧光值最高,并且发酵生产rtPTH,均比野生型(wild type,WT)提高了近1倍.该研究成功挖掘出与蛋白表达相关的基因GL002370和GL000974,这些发现将有助于获得优化的底盘细胞,并为深入研究增加蛋白产量的靶基因提供指导.
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