黑曲霉mRNA的分离及其cDNA的合成和克隆

来源 :中山大学学报：自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：sdnuwjz

【摘要】

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采用酚一蛋白酶K抽提和氯化锂沉淀法,从10g黑曲霉细胞中获得8mg总RNA,经二次寡聚(dT)-纤维素亲和层析纯化得60μg poly(A)~+mRNA。经紫外分光,6M尿素—琼脂糖凝胶电泳分析及

【作者】

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罗进贤李文清

【机构】

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中山大学生物学系及生物工程研究中心

【出处】

：

中山大学学报：自然科学版

【发表日期】

：

1990年3期

【关键词】

：

黑曲霉 MRNA CDNA 重组噬菌体 Aspergillus niger mRNA cDNA synthesis cDNA cloning

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采用酚一蛋白酶K抽提和氯化锂沉淀法,从10g黑曲霉细胞中获得8mg总RNA,经二次寡聚(dT)-纤维素亲和层析纯化得60μg poly(A)~+mRNA。经紫外分光,6M尿素—琼脂糖凝胶电泳分析及体外翻译试验结果证明:纯化的poly(A)~+mRNA的纯度及完整性好,无降解并具翻译活性。以纯化的poly(A)~+mRWA为模板,以寡聚(dT)_(12-18)及随机的寡聚核苷酸为引物,用AMV反向转录酶合成了第一链cDNA。用RNaseH及DNA聚合酶Ⅰ水解模板mRNA并合成双链cDNA。第一链及第二链cD

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