【摘 要】
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[目的]肠道病毒71(Enterovirus 71,EV71)是引发手足口病(Hand-foot-mouth Disease,HFMD)的主要病原体之一,为了筛选EV71抗原表位,开发新型EV71疫苗,利用优化后的PCR点突变技
【机 构】
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吉林农业科技学院生物与制药工程学院;
【基金项目】
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吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(No.吉教科合字[2015]第381号)
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[目的]肠道病毒71(Enterovirus 71,EV71)是引发手足口病(Hand-foot-mouth Disease,HFMD)的主要病原体之一,为了筛选EV71抗原表位,开发新型EV71疫苗,利用优化后的PCR点突变技术定点突变EV71 VP1基因。[方法]设计含有突变位点的互补引物,模板使用量为10 ng,进行单引物PCR,将PCR产物混合后复性,转化至大肠杆菌BL21,筛选阳性克隆并测序。[结果]测序结果表明VP1基因突变率为40%～45%。[结论]该方法对传统的PCR点突变技术进行改进,降低模板使用量,使用单引物PCR,省略DpnⅠ酶解过程,可达到40%～45%的定点突变率,从而降低实验成本、简化操作流程。
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