【摘 要】
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目的 :构建人 p2 1waf1 基因的原核表达载体并在大肠杆菌 JM10 9中高效表达。方法 :从人肝细胞中分离总 RNA,经逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)得到 p2 1waf1 全基因。用原核细
【机 构】
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吉林大学第一医院中心实验室,吉林大学第四医院肝胆外科
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目的 :构建人 p2 1waf1 基因的原核表达载体并在大肠杆菌 JM10 9中高效表达。方法 :从人肝细胞中分离总 RNA,经逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)得到 p2 1waf1 全基因。用原核细胞表达载体构建了 p BV 2 2 0 / p2 1waf1 重组质粒 ,经 DNA测序确认后 ,将其转化到大肠杆菌 JM10 9进行表达、初步纯化。结果 :SDS- PAGE凝胶电泳分离显示在分子量 2 10 0 0处有一诱导蛋白带 ,薄层扫描显示表达产物在诱导 5 h时可达细菌总蛋白的 38% ,Westernblotting证明表达产物与抗人 P2 1waf1 单克隆抗体有特异性免疫反应。结论 :成功构建出 p2 1waf1 表达载体 ,诱导产生蛋白经检测证实为 P2 1waf1 蛋白。
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