【摘 要】
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目的:应用RNA干扰技术研究瞬时受体电位通道6（TRPC6）对IL-1β诱导的类风湿关节炎（RA）成纤维细胞样滑膜细胞（RA-FLS）增殖的影响。方法:RT-qPCR法检测RA和骨关节炎（OA）患者滑膜组织中TR
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院骨科,广州医科大学生理教研室,广州市增城区人民医院骨科,佛山市南海区人民医院骨科
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目的:应用RNA干扰技术研究瞬时受体电位通道6（TRPC6）对IL-1β诱导的类风湿关节炎（RA）成纤维细胞样滑膜细胞（RA-FLS）增殖的影响。方法:RT-qPCR法检测RA和骨关节炎（OA）患者滑膜组织中TRPC6 mRNA的表达水平。组织块联合酶消化法培养RA-FLS。流式细胞术鉴定RA-FLS。将不同浓度（0、0.25、0.5、1、2、4、8、16μg/L）的重组人IL-1β与RA-FLS共培养36 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;16μg/L的IL-1β作用RA-FLS不同时间（12、24、36、48、60、72 h）,CCK-8法检测细胞活力的改变。特异性TRPC6-siRNA转染RA-FLS后,采用RT-qPCR和Western blotting检测沉默效率。在IL-1β存在和不存在的条件下,CCK-8法、Ed U标记法和流式细胞术检测TRPC6干扰组与对照组的细胞活力、Ed U阳性细胞比率和（G2/M+S）期比率的差异。结果:RA患者滑膜组织中TRPC6的mRNA表达水平相对于OA患者明显增加（P<0.05）。TRPC6-siRNA能显著降低RA-FLS中TRPC6 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。IL-1β能诱导RA-FLS增殖（P<0.05）。沉默TRPC6后,在IL-1β的诱导环境下,特异性干扰组RA-FLS的活力、Ed U阳性细胞比率和（G2/M+S）期比率与空白组和对照组相比均明显降低（P<0.05）,而在不含IL-1β的条件下,干扰组与空白组和对照组相比差异均无统计学显著性。结论:TRPC6参与IL-1β诱导的RA-FLS增殖过程,沉默TRPC6能降低IL-1β诱导的RA-FLS增殖水平。
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