酵母双杂交系统筛选IRE1相互作用的蛋白质

来源 :第四军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:candy0533
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目的:寻找与需肌醇酶1(IRE1)相互作用的蛋白质,研究该基因的功能及其在肝细胞凋亡中的作用.方法:采用酵母双杂交方法,分别以hIRE1α(人IRE1α)N端段1-465位氨基酸及C端段468-977位氨基酸为诱饵,与人睾丸cDNA文库质粒先后转化AH109酵母菌株,经三重/四重营养缺陷培养基及X-α-GAL半乳糖苷酶试验筛选,将PCR鉴定为阳性的酵母质粒转入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.最后通过酵母回转杂交实验对获得的相互作用加以验证.结果:成功构建诱饵质粒pGBKT7-IRE1N及pG
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