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构建有效抑制酪氨酸激酶受体B(TrkB)基因的RNA干扰慢病毒表达载体。
方法根据大鼠TrkB基因的不同部位设计4对短发卡RNA (short hairpin RNA, shRNA )寡核苷酸片段，克隆到慢病毒干扰载体pXZRNAi 1.0中，构建shRNA慢病毒表达载体pXZRNAi-shTrkB-1，2，3，4。获得较高滴度的慢病毒颗粒后感染大鼠神经干细胞，应用实时荧光PCR和Western blot方法检测对TrkB的干扰效果。
结果酶切鉴定和测序结果提示慢病毒载体的寡核苷酸链插入正确。包装浓缩慢病毒颗粒的滴度为8.6×105cfu/ml，对神经干细胞感染效率可达80%。与未感染组相比，转染pXZRNAi-shTrkB-3和4的神经干细胞中TrkB mRNA表达水平分别为(66.7±5.5)%和(76.8±4.9)%, TrkB蛋白的表达水平分别为(68.5±4.3)%和(78.2±5.1)%，均差异有统计学意义(P<0.05)。
结论成功构建可高效沉默TrkB基因的pXZRNAi-shTrkB慢病毒载体，为研究TrkB在神经干细胞中的作用提供了有力工具。