【摘 要】
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目的 构建人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsg)×人源化抗CD3双特异双链抗体(aiabody)与重组复合干扰素(consensus Interferon, cIFN)的融合蛋白(抗HBsAg×抗CD3 diabody-cIFN,
【机 构】
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北京地坛医院传染病研究所,北京大学人类疾病基因研究中心
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目的 构建人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsg)×人源化抗CD3双特异双链抗体(aiabody)与重组复合干扰素(consensus Interferon, cIFN)的融合蛋白(抗HBsAg×抗CD3 diabody-cIFN,简称S×3Db-cIFN)的表达载体,在原核表达系统中进行表达,并鉴定表达蛋白的活性.方法 对相关的模板重组载体进行限制性内切酶消化和T4连接酶的连接,构建目的 重组载体pRA-cIFNSHOL和pRA-OHSL,经测序鉴定后分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用SDS-PAGE和Western blotting进行表达鉴定,用GuHCl阶段透析法重新折叠获得目的 蛋白S×3Db-cIFN.用ELISA和流式细胞术进行S×3Db-cIFN的抗HBsAg抗体活性和抗CD3抗体活性.结果 成功构建了表达载体pRA-cIFNSHOL和pRA-OHSL,并实现了大肠杆菌中的高效表达和表达后的重新折叠,获得了目的 蛋白S×3Db-cIFN,蛋白复性率为24%.用ELISA和流式细胞术初步鉴定融合蛋白的活性,结果显示S×3Db-cIFN具有明显的抗HBsAg抗体活性和抗CD3抗体活性.结论 用基因工程方法成功制备了人源(化)抗HBsAg×抗CD3 diabody与cIFN的融合蛋白,此融合蛋白具有抗HBsAg抗体活性和抗CD3抗体活性,有可能成为有效的抗HBV免疫导向药物,有待进一步探讨其应用价值.
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