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【摘 要】 目的：建立测定灯盏细辛药材中焦袂康酸限量的高效液相色谱检查方法。方法：采用JADE-PAK ODS（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，乙腈-水（5∶95）为流动相，流速：1mL/min，检测波长为270nm，柱温30℃。结果：焦袂康酸在0.2028～4.0560mg（r=0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率（n=6）为99.6%， RSD为0.8%。结论：所建立的方法简便可行，结果准确可靠，可用于灯盏细辛中焦袂康酸的限量检查。
【关键词】 不同产地;灯盏细辛;HPLC;焦袂康酸;限量检查
【中图分类号】R927 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）3-0034-03
Abstract：Objective To establish a method for Limited inspection of Pyromeconic acid in Erigeron breviscapus with RP-HPLC. Methods The mobile phase was consisted of Acetonitrile-water （5∶95）， The flow rate was 1.0mL/min， the detective wavelength was 270nm and the column temperature was 30℃. Results The linear range of the method was 0.2028～4.0560mg， the average recovery was 99.6%， RSD was 0.8%. Conclusion The established method is simple and feasible， and the result is accurate and reliable. It can be used for the limited inspection of Pyromeconic acid in Erigeron breviscapus.
Keywords： Different Origins; Erigeron breviscapus; HPLC; Pyromeconic Acid; Limited Inspection
燈盏细辛（灯盏花）为菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus （Vant.） Hand.-Mazz.的干燥全草。灯盏细辛具有活血通络止痛、祛风散寒的作用、用于中风偏瘫、胸痹心痛、风湿痹痛、头痛、牙痛[1]。灯盏细辛（灯盏花）中的焦袂康酸具有降压、镇静的作用[2]，还具有显著增加脑血管流量，改善脑血循环，降低脑血管阻力，提高血脑屏障的通透性，增加心肌营养回流的作用，同时具备提高机体巨噬细胞免疫功能和较强的抑制内凝血等作用[3]。但焦袂康酸具有肝毒性[4-5]，长期服用可能会对患者肝脏有较大的损伤。为了保证本药材临床用药的安全性，本研究建立了用高效液相法测定灯盏细辛中焦袂康酸的限量检查方法。为焦袂康酸的限量检查提供了更为准确可靠的方法。
1 仪器与试药
Waters 2695 液相色谱仪，Waters 2996（PDA）检测器;万分之一Sartorius BS224S型电子分析天平（Sartorius公司，美国）;十万分之一 DENVER TB-215D型电子分析天平（DENVER公司，美国）;AS7240A超声清洗仪（天津奥特赛斯仪器有限公司）。焦袂康酸（上海源叶生物科技有限公司，批号：B20618，≥98%）。实验用水为超纯水，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。19批灯盏花药材均收集于云南省和四川省，经云南中医学院中药学院中药资源教研室李国栋副教授鉴定为灯盏花Erigeron breviscapus （Vant.） Hand-Mazz.见表1。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液 取焦袂康酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.2028mg的溶液。
2.1.2 供试品溶液 取本品0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，加入甲醇40mL，超声处理（300W，25kHz）20min，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2 色谱条件 色谱柱为JADE-PAK ODS（250mm×4.6mm，5μm），乙腈―水（5∶95）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为270nm，进样量10μL。在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液、进样测定。结果如图1所示。
2.3 线性关系的考察 分别精密吸取焦袂康酸对照品溶液1、2、4、6、8、10、20μL，按上述色谱条件，测定焦袂康酸峰面积。分别以焦袂康酸进样量为横坐标（X），以峰面积积分值A为纵坐标（Y），进行线性回归，得线性方程为：Y=57802X-2721.3（r=0.9999），表明焦袂康酸在0.2028～4.0560mg范围内呈现良好的线性。
2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，连续进样5次，记录峰面积。RSD为0.2%，结果表明仪器精密度良好。
2.5 重复性试验 取S1样品，按“2.1.2”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行含量测定，结果焦袂康酸的含量为20.1320mg/g;RSD分别为1.2%，说明测量方法的重复性良好。
2.6 稳定性试验 按“2.1.2”项下方法制备一份供试溶液，精密吸取10μL，分别于0、4、8、12和24h各测定1次，结果5次测定所得的峰面积值的RSD为0.3%。结果表明，室温条件下，供试品溶液中的焦袂康酸在24h内稳定。 2.7 加样回收试验 分别精密称取6份已知含量的样品S1每份约0.25g，精密称定。 精密加入1mL浓度为4.998mg/mL焦袂康酸对照品溶液，按“2.1.2”项下的方法制备供试溶液，进样分析，计算焦袂康酸平均回收率（n=6）为99.60%，RSD为0.8%。表明试验方法准确度好。结果见表2。
2.8 样品中焦袂康酸含量测定 分别称取19批灯盏花药材，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，以外标法计算含量，结果见表3。
3 讨论
本实验通过对提取方法，提取溶剂，提取时间，检测波长分别进行了考察及参照相关文献资料中的有焦袂康酸的含量测定方法[7-9]后进行改进，最后确定了以乙腈-水（5∶95）为流动相，检测波长为270nm，流速1mL/min，样品超声处理（功率300W，频率25kHz）20min对样品中焦袂康酸的含量进行测定， 试验结果表明，样品分离效果好。经方法学考察，本含量测定方法结果较好，方法可行。
在《中国药典》2015年版一部中仅有灯盏生脉胶囊中对焦袂康酸进行了检查，但仅为化学反应，不能进行定量且专属性较差，故本研究采用高效液相色谱法进行焦袂康酸的限量检查。结果表明采用高效液相色谱法进行限量检查更为准确且灵敏度高。
文献报道中[5-6]焦袂康酸被用作小鼠慢性肝炎病理研究的工具药，在该实验中小鼠每日摄入量为18.6mg。目前暂时缺少该成分对人体产生伤害的最低限量的报道，其具体限量要求还需要进一步药理和临床研究后再要求。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015：147-148.
[2]胡昌奇， 张德成， 李程. 灯盏花中一种新的吡喃酮甙[J]. 上海医科大学学报， 1987（3）：182-183.
[3]孫汉董，岳建明，陈玉磐，等. 焦袂康酸及其葡萄糖苷（飞蓬苷）在制药中的应用：中国，1136435A[P].1996.
[4]张明伟，廖亚玲. 高效液相色谱法测定灯盏花素微乳中野黄芩苷的含量[J].中国医院药学杂志，2010，30（16）：1415-1416.
[5]Kitamura K， Iwasaki H O， Yasoshima A， et al. Pathology of chemically induced chronic active hepatitis in mice [J]. Experimental & Molecular Pathology， 1992， 57（2）： 153.
[6]Bhathal P S， Ho S L， Hegarty M P， et al. Chronic active hepatitis in mice induced by 3-hydroxy-4-pyrone [J]. Experientia， 1984， 40（8）： 894.
[7]宋利，赵好冬，杜延佳，等. 一年蓬不同部位中焦袂康酸的含量测定[J].中国现代中药，2014，16（6）：451-453.
[8]黄晓燕，丁野，郑金凤，等. 灯盏花素分散片质量标准研究[J].中国药业，2013，22（14）：64-67.
[9]龙海燕，黄晓燕. 高效液相色谱法测定灯盏细辛胶囊中焦袂康酸的含量 [J].中南药业，2011，9（3）：188-190.
（收稿日期：2018-12-14 编辑：刘 斌）
【关键词】 不同产地;灯盏细辛;HPLC;焦袂康酸;限量检查
【中图分类号】R927 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）3-0034-03
Abstract：Objective To establish a method for Limited inspection of Pyromeconic acid in Erigeron breviscapus with RP-HPLC. Methods The mobile phase was consisted of Acetonitrile-water （5∶95）， The flow rate was 1.0mL/min， the detective wavelength was 270nm and the column temperature was 30℃. Results The linear range of the method was 0.2028～4.0560mg， the average recovery was 99.6%， RSD was 0.8%. Conclusion The established method is simple and feasible， and the result is accurate and reliable. It can be used for the limited inspection of Pyromeconic acid in Erigeron breviscapus.
Keywords： Different Origins; Erigeron breviscapus; HPLC; Pyromeconic Acid; Limited Inspection
燈盏细辛（灯盏花）为菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus （Vant.） Hand.-Mazz.的干燥全草。灯盏细辛具有活血通络止痛、祛风散寒的作用、用于中风偏瘫、胸痹心痛、风湿痹痛、头痛、牙痛[1]。灯盏细辛（灯盏花）中的焦袂康酸具有降压、镇静的作用[2]，还具有显著增加脑血管流量，改善脑血循环，降低脑血管阻力，提高血脑屏障的通透性，增加心肌营养回流的作用，同时具备提高机体巨噬细胞免疫功能和较强的抑制内凝血等作用[3]。但焦袂康酸具有肝毒性[4-5]，长期服用可能会对患者肝脏有较大的损伤。为了保证本药材临床用药的安全性，本研究建立了用高效液相法测定灯盏细辛中焦袂康酸的限量检查方法。为焦袂康酸的限量检查提供了更为准确可靠的方法。
1 仪器与试药
Waters 2695 液相色谱仪，Waters 2996（PDA）检测器;万分之一Sartorius BS224S型电子分析天平（Sartorius公司，美国）;十万分之一 DENVER TB-215D型电子分析天平（DENVER公司，美国）;AS7240A超声清洗仪（天津奥特赛斯仪器有限公司）。焦袂康酸（上海源叶生物科技有限公司，批号：B20618，≥98%）。实验用水为超纯水，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。19批灯盏花药材均收集于云南省和四川省，经云南中医学院中药学院中药资源教研室李国栋副教授鉴定为灯盏花Erigeron breviscapus （Vant.） Hand-Mazz.见表1。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液 取焦袂康酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.2028mg的溶液。
2.1.2 供试品溶液 取本品0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，加入甲醇40mL，超声处理（300W，25kHz）20min，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2 色谱条件 色谱柱为JADE-PAK ODS（250mm×4.6mm，5μm），乙腈―水（5∶95）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为270nm，进样量10μL。在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液、进样测定。结果如图1所示。
2.3 线性关系的考察 分别精密吸取焦袂康酸对照品溶液1、2、4、6、8、10、20μL，按上述色谱条件，测定焦袂康酸峰面积。分别以焦袂康酸进样量为横坐标（X），以峰面积积分值A为纵坐标（Y），进行线性回归，得线性方程为：Y=57802X-2721.3（r=0.9999），表明焦袂康酸在0.2028～4.0560mg范围内呈现良好的线性。
2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，连续进样5次，记录峰面积。RSD为0.2%，结果表明仪器精密度良好。
2.5 重复性试验 取S1样品，按“2.1.2”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行含量测定，结果焦袂康酸的含量为20.1320mg/g;RSD分别为1.2%，说明测量方法的重复性良好。
2.6 稳定性试验 按“2.1.2”项下方法制备一份供试溶液，精密吸取10μL，分别于0、4、8、12和24h各测定1次，结果5次测定所得的峰面积值的RSD为0.3%。结果表明，室温条件下，供试品溶液中的焦袂康酸在24h内稳定。 2.7 加样回收试验 分别精密称取6份已知含量的样品S1每份约0.25g，精密称定。 精密加入1mL浓度为4.998mg/mL焦袂康酸对照品溶液，按“2.1.2”项下的方法制备供试溶液，进样分析，计算焦袂康酸平均回收率（n=6）为99.60%，RSD为0.8%。表明试验方法准确度好。结果见表2。
2.8 样品中焦袂康酸含量测定 分别称取19批灯盏花药材，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，以外标法计算含量，结果见表3。
3 讨论
本实验通过对提取方法，提取溶剂，提取时间，检测波长分别进行了考察及参照相关文献资料中的有焦袂康酸的含量测定方法[7-9]后进行改进，最后确定了以乙腈-水（5∶95）为流动相，检测波长为270nm，流速1mL/min，样品超声处理（功率300W，频率25kHz）20min对样品中焦袂康酸的含量进行测定， 试验结果表明，样品分离效果好。经方法学考察，本含量测定方法结果较好，方法可行。
在《中国药典》2015年版一部中仅有灯盏生脉胶囊中对焦袂康酸进行了检查，但仅为化学反应，不能进行定量且专属性较差，故本研究采用高效液相色谱法进行焦袂康酸的限量检查。结果表明采用高效液相色谱法进行限量检查更为准确且灵敏度高。
文献报道中[5-6]焦袂康酸被用作小鼠慢性肝炎病理研究的工具药，在该实验中小鼠每日摄入量为18.6mg。目前暂时缺少该成分对人体产生伤害的最低限量的报道，其具体限量要求还需要进一步药理和临床研究后再要求。
参考文献
[1]国家药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015：147-148.
[2]胡昌奇， 张德成， 李程. 灯盏花中一种新的吡喃酮甙[J]. 上海医科大学学报， 1987（3）：182-183.
[3]孫汉董，岳建明，陈玉磐，等. 焦袂康酸及其葡萄糖苷（飞蓬苷）在制药中的应用：中国，1136435A[P].1996.
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[5]Kitamura K， Iwasaki H O， Yasoshima A， et al. Pathology of chemically induced chronic active hepatitis in mice [J]. Experimental & Molecular Pathology， 1992， 57（2）： 153.
[6]Bhathal P S， Ho S L， Hegarty M P， et al. Chronic active hepatitis in mice induced by 3-hydroxy-4-pyrone [J]. Experientia， 1984， 40（8）： 894.
[7]宋利，赵好冬，杜延佳，等. 一年蓬不同部位中焦袂康酸的含量测定[J].中国现代中药，2014，16（6）：451-453.
[8]黄晓燕，丁野，郑金凤，等. 灯盏花素分散片质量标准研究[J].中国药业，2013，22（14）：64-67.
[9]龙海燕，黄晓燕. 高效液相色谱法测定灯盏细辛胶囊中焦袂康酸的含量 [J].中南药业，2011，9（3）：188-190.
（收稿日期：2018-12-14 编辑：刘 斌）