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【摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定肠炎安康胶囊中芍药苷的含量。方法：采用十八烷基键合硅胶色谱柱（46mm×250mm，5μm）；以乙腈-水（14：86）为流动相，流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：230nm。结果：芍药苷进样量在01556～15560μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=09999）；平均回收率为9886%（RSD为037%）。结论：本方法准确、快速、简便，结果稳定，可用于肠炎安康胶囊中芍药苷的含量测定。
【关键词】肠炎安康胶囊；芍药苷；高效液相色譜法；含量测定
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0021-03
Determination of Paeoniflorin in Changyanankang capsule by HPLC
ZHANG Shun ping1ZHANG Shun ji2
1Qujing Inspection Center for Food and Drug，Qujing 655000，China；2The First Peoples Hospital of Qujing，Qujing 655000，China
Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Paeoniflorin in changyanankang capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （46mm×250mm， 5μm）； With acetonitrile - water （14∶86） were as mobile phase， flow rate of 10mL/min； Column temperature： 30 ℃ detection wavelength 230 nm.Results Good linearity was shown in the range of 01556～15560μg.Paeoniflorin with the average recovery of 9886%（RSD=037%）.Conclusion This method is accurate， rapid， simple and stable results. can be used for determination the content of Paeoniflorin in Changyanankang capsule.
Keywords：Changyanankang； Paeoniflorin； HPLC； Content Determination
肠炎安康胶囊是云南省曲靖市第一人民医院的院内制剂，处方由白芍、金荞麦、党参等十味药组成，具有补中益气、健胃化湿、消炎止痛的功效，临床主要用于治疗结肠炎和其他肠道炎症。在现行质量标准[1]中未建立含量测定方法。白芍作为处方中的主药，其有效成分为芍药苷，因此本研究应用HPLC法对芍药苷进行含量测定。
1仪器与材料
11仪器Agilent1200型高效液相色谱仪（四元泵，自动进样器，柱温箱， VWD检测器美国安捷伦科技公司）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；一体式超纯水仪（PURELAB Flex 3，英国ELGA公司）。
12试药肠炎安康胶囊（规格为04g×50粒/瓶，批号：20150502、20150711、20151119，云南省曲靖市第一人民医院制剂室）；芍药苷对照品（批号： 110736-201539，含量964%，中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
21色谱条件色谱柱：Amethyst C18-H（200 mm×46，5μm）； 流动相：乙腈-水 （14∶86）， 流速：10mL/min； 柱温：30℃，；检测波长：230nm；进样量：5μL。
22溶液制备
221供试品溶液制备取本品内容物20粒，混匀，取约09g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入甲醇约15mL，超声（频率：40KHz；功率：500W）40min，取出，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用045μm微孔滤膜滤过，即得。
222对照品储备液的制备精密称取芍药苷对照品2018mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液（浓度为：07781mg/mL）再精密量取上述溶液5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品使用溶液（浓度为01556mg/mL）。
223阴性样品溶液制备按处方及工艺制备缺白芍药材的阴性样品（由云南省曲靖第一人民医院提供），再按“221”项下方法制备阴性样品溶液。
23线性关系的考察分别精密吸取“222”项下制备的芍药苷对照品溶液1、2、3、5、8、10μL在上述色谱条件进样分析，分别重复进样三次，记录峰面积，以对照品质量X为横坐标，峰面积平均值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程：Y=13235000X-16769（r=09999）。结果表明芍药苷进样量在01556～15560μg范围内具有良好线性关系。
24重复性试验取同一批样品（批号20151119），精密称取6份，每份约09g。按221”项下的方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样5μL测定，记录峰面积。结果测得每1g样品中含芍药苷33628mg，RSD=063%。 25精密度试验精密吸取在“222”项下制备的芍药苷对照品溶液在上述色谱条件下连续进样6次，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD为047%，表明该仪器精密度良好。
[JP4]26稳定性试验取同一样品溶液（批号20151119），[JP+2]在同1色谱条件下，分别于制备后0、2、4、8、12、24h进行分析，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD为076%，表明样品溶液在24h较稳定。[JP]
27回收率试验分别取同一批样品（批号20151119）6份，每份约045g，精密称定，分别精密加入对照品储备溶液（浓度为07781mg/mL）25mL，按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，分别测定，计算回收率。平均回收率为9886%，RSD为037%。结果见表1。
28专属性试验分别精密吸取供试品溶液、芍药苷对照品使用溶液和阴性样品溶液各5μL，在上述色谱条件下，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果详见图1。结果可见，在与对照品色谱峰相应的位置上样品具有相同保留時间的色谱峰，阴性样品在对应位置无吸收，供试品中主峰与其相邻色谱峰均能达到基线分离，对本品中芍药苷的测定无干扰。
3讨论
31提取方法的确定本试验中采用稀乙醇提取[2]、超纯水直接提取、甲醇直接提取。结果采用甲醇超声40min后，芍药苷含量较前两种方法提取有较大提高，表面第三种方法更能将样品中的芍药苷提取完全，最终确定采用甲醇超声提取（频率：45KHz；功率：240W）时间确定为40min。
32流动相的确定参考中国药典及相关文献中芍药苷的含量测定报道[3-4]，分别采用：乙腈：01%磷酸（14∶86，V/V） 、甲醇-002mol/L磷酸二氢钾溶液（28∶72，V/V）和乙腈：水（14：86，V/V），同时试用了不同比例进行考察，结果发现三种方法均能达到要求，综合经济、高效的原则，最终确定采用乙腈-水 （14∶86，V/V）保留时间合适且各成分获得较好的分离。
33在实验过程中发现，进样体积不易过大，当进样体积≥15μL时，色谱峰就会出现拖尾现象，而且随着进样量的提高会越来越严重，因此考虑，进样量尽量控制在10μL以内。
综上，该方法准确、快速、结果稳定，可用于肠炎安康胶囊中芍药苷的含量测定。
参考文献
[1][JP3]云南省食品药品监督管理局.云南医院制剂标准[S].滇ZJF/2005-556.[JP]
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：105，666.
[3] 郭强，王梅.HPLC法测定坤灵丸中芍药苷的含量[J].中医研究，2013，26（8）：69-71
[4]杜蓉，张孟佑. HPLC法测定加味逍遥丸中芍药苷与甘草苷的含量[J].中国药房，2015（18）2571-2572.
（收稿日期：2017-01-23编辑：程鹏飞）
【关键词】肠炎安康胶囊；芍药苷；高效液相色譜法；含量测定
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0021-03
Determination of Paeoniflorin in Changyanankang capsule by HPLC
ZHANG Shun ping1ZHANG Shun ji2
1Qujing Inspection Center for Food and Drug，Qujing 655000，China；2The First Peoples Hospital of Qujing，Qujing 655000，China
Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Paeoniflorin in changyanankang capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column （46mm×250mm， 5μm）； With acetonitrile - water （14∶86） were as mobile phase， flow rate of 10mL/min； Column temperature： 30 ℃ detection wavelength 230 nm.Results Good linearity was shown in the range of 01556～15560μg.Paeoniflorin with the average recovery of 9886%（RSD=037%）.Conclusion This method is accurate， rapid， simple and stable results. can be used for determination the content of Paeoniflorin in Changyanankang capsule.
Keywords：Changyanankang； Paeoniflorin； HPLC； Content Determination
肠炎安康胶囊是云南省曲靖市第一人民医院的院内制剂，处方由白芍、金荞麦、党参等十味药组成，具有补中益气、健胃化湿、消炎止痛的功效，临床主要用于治疗结肠炎和其他肠道炎症。在现行质量标准[1]中未建立含量测定方法。白芍作为处方中的主药，其有效成分为芍药苷，因此本研究应用HPLC法对芍药苷进行含量测定。
1仪器与材料
11仪器Agilent1200型高效液相色谱仪（四元泵，自动进样器，柱温箱， VWD检测器美国安捷伦科技公司）；KQ-300UDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；一体式超纯水仪（PURELAB Flex 3，英国ELGA公司）。
12试药肠炎安康胶囊（规格为04g×50粒/瓶，批号：20150502、20150711、20151119，云南省曲靖市第一人民医院制剂室）；芍药苷对照品（批号： 110736-201539，含量964%，中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
21色谱条件色谱柱：Amethyst C18-H（200 mm×46，5μm）； 流动相：乙腈-水 （14∶86）， 流速：10mL/min； 柱温：30℃，；检测波长：230nm；进样量：5μL。
22溶液制备
221供试品溶液制备取本品内容物20粒，混匀，取约09g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入甲醇约15mL，超声（频率：40KHz；功率：500W）40min，取出，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用045μm微孔滤膜滤过，即得。
222对照品储备液的制备精密称取芍药苷对照品2018mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液（浓度为：07781mg/mL）再精密量取上述溶液5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品使用溶液（浓度为01556mg/mL）。
223阴性样品溶液制备按处方及工艺制备缺白芍药材的阴性样品（由云南省曲靖第一人民医院提供），再按“221”项下方法制备阴性样品溶液。
23线性关系的考察分别精密吸取“222”项下制备的芍药苷对照品溶液1、2、3、5、8、10μL在上述色谱条件进样分析，分别重复进样三次，记录峰面积，以对照品质量X为横坐标，峰面积平均值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算线性回归方程：Y=13235000X-16769（r=09999）。结果表明芍药苷进样量在01556～15560μg范围内具有良好线性关系。
24重复性试验取同一批样品（批号20151119），精密称取6份，每份约09g。按221”项下的方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样5μL测定，记录峰面积。结果测得每1g样品中含芍药苷33628mg，RSD=063%。 25精密度试验精密吸取在“222”项下制备的芍药苷对照品溶液在上述色谱条件下连续进样6次，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD为047%，表明该仪器精密度良好。
[JP4]26稳定性试验取同一样品溶液（批号20151119），[JP+2]在同1色谱条件下，分别于制备后0、2、4、8、12、24h进行分析，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD为076%，表明样品溶液在24h较稳定。[JP]
27回收率试验分别取同一批样品（批号20151119）6份，每份约045g，精密称定，分别精密加入对照品储备溶液（浓度为07781mg/mL）25mL，按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，分别测定，计算回收率。平均回收率为9886%，RSD为037%。结果见表1。
28专属性试验分别精密吸取供试品溶液、芍药苷对照品使用溶液和阴性样品溶液各5μL，在上述色谱条件下，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果详见图1。结果可见，在与对照品色谱峰相应的位置上样品具有相同保留時间的色谱峰，阴性样品在对应位置无吸收，供试品中主峰与其相邻色谱峰均能达到基线分离，对本品中芍药苷的测定无干扰。
3讨论
31提取方法的确定本试验中采用稀乙醇提取[2]、超纯水直接提取、甲醇直接提取。结果采用甲醇超声40min后，芍药苷含量较前两种方法提取有较大提高，表面第三种方法更能将样品中的芍药苷提取完全，最终确定采用甲醇超声提取（频率：45KHz；功率：240W）时间确定为40min。
32流动相的确定参考中国药典及相关文献中芍药苷的含量测定报道[3-4]，分别采用：乙腈：01%磷酸（14∶86，V/V） 、甲醇-002mol/L磷酸二氢钾溶液（28∶72，V/V）和乙腈：水（14：86，V/V），同时试用了不同比例进行考察，结果发现三种方法均能达到要求，综合经济、高效的原则，最终确定采用乙腈-水 （14∶86，V/V）保留时间合适且各成分获得较好的分离。
33在实验过程中发现，进样体积不易过大，当进样体积≥15μL时，色谱峰就会出现拖尾现象，而且随着进样量的提高会越来越严重，因此考虑，进样量尽量控制在10μL以内。
综上，该方法准确、快速、结果稳定，可用于肠炎安康胶囊中芍药苷的含量测定。
参考文献
[1][JP3]云南省食品药品监督管理局.云南医院制剂标准[S].滇ZJF/2005-556.[JP]
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：105，666.
[3] 郭强，王梅.HPLC法测定坤灵丸中芍药苷的含量[J].中医研究，2013，26（8）：69-71
[4]杜蓉，张孟佑. HPLC法测定加味逍遥丸中芍药苷与甘草苷的含量[J].中国药房，2015（18）2571-2572.
（收稿日期：2017-01-23编辑：程鹏飞）