【摘 要】
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目的 获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法 设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PC
【机 构】
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第二军医大学长征医院呼吸内科,第二军医大学长征医院呼吸内科,第二军医大学长征医院呼吸内科,第二军医大学医学遗传教研室,第二军医大学医学遗传教研室,第二军医大学医学遗传教研室,第二军医大学医学遗传教研室
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目的 获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法 设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)从CTLL- 2细胞总RNA中扩增ROG基因 ,测序成功后 ,最终连接于pAAV- MCS ,双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒 ,并在Hela细胞中表达 ;制备高滴度重组腺相关病毒。结果 成功扩增了小鼠ROG基因 ,构建表达ROG基因的重组腺相关病毒表达载体 ,并成功表达于Hela细胞。结论 本实验构建的小鼠ROG重组腺相关病毒将为哮喘的基因治疗研究奠定物质基础。
OBJECTIVE: To obtain the mouse repressor of GATA-3 gene, and to construct recombinant adeno-associated virus vector expressing ROG to prepare adeno-associated virus. Methods The primers were designed and synthesized. The ROG gene was amplified from the total RNA of CTLL-2 cells by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). After successful sequencing, the ROG gene was finally ligated into pAAV-MCS. Plasmid, and expressed in Hela cells; preparation of high-titer recombinant adeno-associated virus. Results The mouse ROG gene was successfully amplified, and a recombinant adeno-associated virus expression vector expressing ROG gene was constructed and successfully expressed in Hela cells. Conclusion The mouse ROG recombinant adeno-associated virus constructed in this study will lay a material foundation for the gene therapy research of asthma.
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