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目的建立检测梅毒螺旋体（TP）、单纯疱疹病毒（HSV）和杜克雷嗜血杆菌（HD）的双色荧光定量聚合酶链反应（DC-FQ-PCR）方法，并评价其在诊断生殖器溃疡性疾病（GUD）病因中的临床价值。方法根据TP、HSV和HD的基因库序列设计引物，对3株参考株进行扩增，证实其特异性；再设计探针做三种参考株的双色荧光定量PCR；以10倍稀释不同浓度模板扩增测定其敏感度。同时检测320份生殖器溃疡处分泌物标本，每份标本同时进行暗视野显微镜（D-F）、梅毒血清学试验（STS）、HD培养和酶免疫法（EIA）检查HSV抗原。