【摘 要】
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目的为进行药用植物次生代谢产物的生物合成基因调控研究,构建了三年生何首乌叶cDNA文库。方法以何首乌成熟叶片为材料提取其总RNA;纯化出mRNA;反转录合成双链cDNA;钝化cDNA
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目的为进行药用植物次生代谢产物的生物合成基因调控研究,构建了三年生何首乌叶cDNA文库。方法以何首乌成熟叶片为材料提取其总RNA;纯化出mRNA;反转录合成双链cDNA;钝化cDNA末端;连接上EcoR接头;经Xho酶切后,使用Sepharose CL-2B凝胶介质滤过,收集400bp以上的片段与Uni-ZAP XR载体连接,经包装蛋白包装成cDNA文库。Uni-ZAPXR载体可以在辅助噬菌体ExAssist helper phage的共感染下,快速释放出pBluescript SK-噬菌粒,经转染E.coliSOLR后,铺于氨苄青霉素抗性平板,分别利用PCR和双酶切的方法鉴定插入片段的大小。结果测定该初始文库的滴度为1.07×106pfu/mL,含有5.4×105个重组子,插入片断长度为0.5～2.0kb;扩增文库的重组子为4.25×1011个,重组率为98.5%。结论经检测所构建的文库库容量满足基因筛选要求,为进行中药材相关功能基因调控研究奠定基础。
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