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目的 分离和纯化大鼠的胰腺导管上皮细胞,在体外培养并诱导其向胰岛细胞定向分化.方法 采用胶原酶逆行灌注法消化、密度梯度离心结合不同细胞贴壁差异性分离和纯化胰腺导管上皮细胞;以角蛋白-19(CK-19)免疫细胞化学染色进行鉴定;用RMPI 1640+含体积分数为10%的胎牛血清(FBS)培养基培养促进胰导管上皮细胞增殖,1周后,更换无血清培养基DMEM/F12并加入角朊细胞生长因子等进一步促进其增殖,细胞达80%汇合时传代,加入高糖及尼克酰胺促进胰导管上皮细胞向胰岛细胞定向分化;对胰岛样结构行双硫腙染色.结果 CK-19染色结果证实所获细胞绝大多为导管上皮细胞.体外培养中导管上皮细胞24 h开始贴壁,14～21 d达80%融合并形成细胞克隆,第28 d胰岛细胞样结构形成,且被双硫腙染成猩红色.结论 采用密度梯度离心结合差异贴壁法可获得纯化的大鼠胰腺导管上皮细胞,在体外培养与诱导分化条件下可生成胰岛样结构。