小鼠角膜组织石蜡切片制作方法的探讨

来源 :眼科新进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Michellesy
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目的探讨一种效果较好的小鼠角膜石蜡切片制作方法。方法 取30只BALB/C小鼠取出眼球后,A组20只眼球,用固定液1(体积分数10%中性甲醛10mL、体积分数95%乙醇85mL、冰醋酸5mL混合)固定;B组20只眼球,用固定液2(多聚甲醛4g,加入0.1mol.L-1磷酸缓冲液80mL,加热至60℃左右,持续搅拌,使粉末完全溶解,加少许1mol.L-1NaOH澄清。待冷却后,加冰醋酸5mL、丙酮10mL,用0.1mol.L-1磷酸缓冲液补足至100mL)固定;C组20只眼球,用固定液3(无水乙醇60mL、体积分数10%中性甲醛10mL、冰醋酸10mL、氯仿20mL混匀)固定。所有眼球标本固定2h后,显微镜下去除巩膜、虹膜、晶状体,完整保留角膜。固定24h后,分别做HE染色和免疫组织化学染色,显微镜下观察其差异。结果 大体观察:A组部分角膜皱缩变形;B组、C组角膜外形均无明显变化,无皱缩和凹陷变形,能保持原有的形态。HE染色示A组标本染色鲜明,角膜各层结构清楚,但是角膜基质层出现明显脱水现象;B组标本未见明显脱水现象,但角膜结构过度压缩,出现明显的脱片现象;C组标本可观察到角膜各层组织结构完整,无明显结构改变,未见脱片及基质层脱水现象,角膜各层组织结构清晰无裂隙。免疫组织化学染色3组均显示HVEM阳性,但C组标本染色效果优于A组、B组,且脱片程度低,固定液3适用于角膜组织的固定。结论 固定液3固定角膜组织,效果优于其他两种固定液。
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