研究在新生鼠支气管肺发育不良(BPD)发生、发展中肺泡Ⅱ型肺上皮细胞(AT2)标志物肺表面活性物质C(SPC)、E-钙黏白(E-cad)及间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白动态表达变化,阐明肺上皮向间质转化(EMT)在BPD新生鼠肺发育障碍中的意义。
方法建立高体积分数氧暴露致新生鼠BPD模型(BPD组),以同样数量且暴露于空气中的新生鼠作为对照(对照组),2组于出生第3、7、14、21天采集肺组织标本,采用放射状肺泡计数(RAC值)、肺泡间隔厚度、肺泡面积/肺分隔面积(A/S)评价肺泡发育,分别应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)及Western-blot,检测AT2中上皮细胞标志物SPC、E-cad和间质细胞标志物N-cad、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平。
结果对照组和BPD组新生鼠RAC值、肺泡间隔厚度和A/S在第7、14、21天,对照组RAC值(7.38±0.92、9.25±0.70、9.88±0.99)和A/S(2.53±0.02、3.34±0.09、3.96±0.13)均高于BPD组RAC值(5.88±0.83、5.14±0.83、4.38±0.52)和A/S(1.88±0.03、1.95±0.03、1.89±0.02)(P均<0.05),而BPD组肺泡间隔厚度(8.53±0.04、10.75±0.46、13.55±0.84)明显大于对照组(5.77±0.09、4.40±0.12、3.67±0.18)(P均<0.01)。第7、14、21天,对照组肺组织的E-cad的mRNA(2.43±0.60、2.59±0.48、3.37±0.53)及蛋白(18.39±1.77、18.29±1.52、11.48±1.72)的表达水平明显高于BPD组(mRNA:1.48±0.55、1.57±0.48、1.12±0.45;蛋白:9.50±1.38、8.57±1.06、8.22±1.31)(P均<0.05),而SPC表达明显低于BPD组(P均<0.05);第7、14、21天,BPD组间质细胞标记物N-cad、α-SMA明显高于对照组(P均<0.05)。
结论在BPD肺泡发育不良阶段,上皮细胞标志物水平下调(E-cad),间质细胞标志物水平上调,提示EMT可能参与了BPD发生过程。